Thermo Scientificトランスポゾン製品は、バクテリオファージMuの転位に基づいています。ファージのライフサイクルの溶解段階では、宿主ゲノム内で繰り返し転位することで、そのゲノムを複製します。Mu転位反応は、単一の酵素であるMuAトランスポサーゼによって触媒されるin vitro反応に改良されました。このシステムでは、1回のin vitro反応で100万個を超えるトランスポゾン挿入クローンを作製できます。

特長

Mutation Generation System（MGSキット）およびStop Generation System（STOPキット）が、タンパク質の機能解析用に開発されました。これらの新しいトランスポゾンツールを使用すると、他のどの方法よりも短時間で、単一の反応によって変異タンパク質の飽和ライブラリを作成できます。各変異クローンにおけるトランスポゾン挿入の位置は、PCRまたはシーケンシングによってマッピングできます。MGSおよびSTOPキットを使用すると、数千の変異クローンをわずか2∼3日で発現研究に使用できます。

MGSキットには、標的タンパク質のトランスポゾンベースのリンカースキャン変異導入用試薬一式が含まれています。MGSエントランスポゾンは、対応する標的遺伝子に15 bpのフレーム内リンカーを挿入することで、標的タンパク質の構造をわずかに変化させるように設計されています。このフレーム内挿入により、下流シーケンスを保存できます。

STOPキットエントランスポゾンには、トランスポソンシケーンス末端部分にある3つのすべての測定フレームにトランスレーショナル停止コドンが含まれています。特許取得済みのStop Generation Systemの改良により、最大3つのアミノ酸を添加することで、ほぼすべての標的タンパク質から飽和C末端欠失ライブラリを作製できます。

特長：

効率的—1回の反応でシーケンシングおよびタンパク質解析用の飽和挿入ライブラリを作製
高速—従来の方法よりもハンズオン時間を短縮
ランダム—標的部位の選好性や挿入ホットスポットが不要

アプリケーション

Stopキットで、以下の機能アッセイ用の短縮型タンパク質を作製できます。

•酵素
•受容体
•構造タンパク質など。

MGSキットは、任意の標的DNAにランダムに15の塩基対をin vitroで挿入し、以下を実現します：

•機能解析用のあらゆるタンパク質の5アミノ酸インフレーム挿入ライブラリを迅速に作製できます
• クローン化プロモーター領域や他の制御DNA領域に迅速かつランダムな突然変異を形成できます
• 任意のターゲットDNAクローンにNotI制限酵素部位をランダムに挿入できます

利点
MGSキット

• 1回の反応で数千もの異なる挿入クローンが得られます
• 3つのリーディングフレームすべてに5アミノ酸をランダムに挿入できます
• インフレーム挿入が短く終止コドンがありません
• 目的の変異のマッピングにおける柔軟性があり、NotIまたはPCRにより、変異を簡単にマッピングできます
• リンカースキャニング変異導入法よりも迅速で効果的です
• STOPキット

• 2日で1回の反応により短縮型タンパク質の飽和ライブラリが得られます
• 3つリーディングフレームすべてに翻訳終止（STOP）コドンがあります
• ターゲットDNA配列が不明でも可能です
• 従来の方法よるも速く、効果的です
• 専用のプライマーは必要ありません

関連製品
Mutation Generation Systemキット
MuAトランスポザーゼ