DH10B細胞（K123120）でも使用できるThermo Scientific CloneJET PCRクローニングキットは、耐熱性DNAポリメラーゼを使用して合成したPCR産物の高効率クローニング用の高度なポジティブセレクションシステムです。その他の平滑末端または付着末端DNA断片のクローニングが可能です。リン酸化または非リン酸化DNA断片に適しています。同梱のポジティブセレクションベクターへのライゲーションに要する時間は、わずか 5 分で、99% 以上の組換えクローンを産生します。校正活性を持つ酵素で合成した平滑末端PCR産物を、クローニングベクターへ直接ライゲーションさせます。

非校正DNAポリメラーゼまたは、DNAポリメラーゼの混合物で作成したPCR産物は、ライゲーションの前にキットで提供している耐熱性DNA平滑酵素を使用して5分で平滑化します。通常の実験用のすべての大腸菌株は、ライゲーション産物で直接、形質転換させることができます。

特長

CloneJET PCRクローニングキットは、すぐに使用可能な新規のポジティブセレクションクローニングベクターpJET1.2／平滑を含みます。ベクターは致死性の制限酵素遺伝子を含んでいます。クローニング部位へのインサートDNAのライゲーションにより、その制限酵素遺伝子は機能を喪失します。結果として、組換えプラスミドを持つ細菌性細胞のみにコロニー形成させることが可能になります。インサートを持たない再環化pJET1.2 /bluntベクターは、形質転換後、宿主大腸菌細胞を死滅させる致死制限酵素を発現します。このポジティブセレクションにより、コロニースクリーニングのプロセスが急速化し、青白選択にかかる追加費用を削減することができます。

インサートのマッピングや操作を簡単にするために、pJET1.2／平滑クローニングベクターのマルチクローニングサイトは、インサート部位に隣接する2つのBglII認識配列を含んでいます。さらにベクターには、in vitroおよびin vivo転写用およびインサートのシーケンシング用にT7プロモーターを含んでいます。

特長

• 迅速—わずか5分でのPCRクローニング
• 最高の効率 – 陽性クローン99%超
• クローニングバックグラウンドなし—ポジティブセレクションベクター
• 汎用性—平滑末端または付着末端クローニングに適合
• 経済的—低コストの青／白スクリーニング

アプリケーション

• 10 kbまでの平滑末端または3'末端にdAを付加したPCR産物のクローニング
• 制限酵素で作成したDNA断片のクローニング
• クローン化DNAシーケンシング
• T7プロモーターからのクローン化インサートのin vitroおよびin vivo転写

次のものが含まれます

• pJET1.2／平滑クローニングベクター
• T4 DNAリガーゼ
• 2倍の反応バッファー
• DNA平滑酵素
• pJET1.2 フォワードシーケンシングプライマー（5'-CGACTCACTATAGGGAGAGCGGC-3'）
• pJET1.2 逆シーケンシングプライマー（5'-AAGAACATCGATTTTCCATGGCAG-3’）
• コントロールPCR製品 水、ヌクレアーゼフリー
• 詳細なプロトコル

エレクトロポレーションの前に、GeneJET PCR Purification Kit #K0701を使用して、常に、ライゲーション混合物をカラム浄化するか、またはクロロホルムでそれを抽出します。エレクトロポレーションは、混合物中のタンパク質および食塩の存在によって阻害されます。

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