JAK/STAT3 シグナル伝達経路は IL-6 などのサイトカインによって活性化されることが知られています。この経路では、IL-6 を細胞表面受容体に結合させることで、JAK が活性化し、これにより、特定のチロシン残基（Y705）で STAT3 タンパク質をリン酸化活性化します。LanthaScreen™ STAT3 GripTite™ は、GFP-STAT3 融合タンパク質を恒常的に発現するヒト細胞株です。JAK/STAT シグナル伝達経路はこの細胞株では機能的にインタクトであることが知られているため、GFP-STAT3 融合タンパク質は IL-6 誘導リン酸化の基質として機能します。この細胞株を使用して、分解された FRET（TR-FRET）リードアウトでテルビウム標識抗 pY705-STAT3 抗体を使用して細胞ライセート中に GFP-STAT3 のリン酸化状態を検出する溶解免疫測定法が開発されました。

™ リポフェクタミン™ 2000 トランスフェクション試薬を使用して GFP-STAT3 DNA 発現コンストラクトを GripTite HEK 293 細胞株にトランスフェクションし、トランスフェクションした細胞をブラスティシンで選択しました。この細胞株は、ソートマーカーとして GFP 蛍光を使用してフローサイトメトリーによって単離されたクローン集団です。’この細胞株を使用したアッセイは、JAK を介した GFP-STAT3 リン酸化のリガンドとして IL-6 を使用して、最適化された条件下で EC50 および Z 因子に対して検証されています。このアッセイは、細胞のプレーティング密度、刺激時間、DMSO 耐性、アッセイ平衡時間など、さまざまな実験条件下でもテストされています。別の “mix-and-read” アッセイフォーマットについても説明します。