Zero Blunt™ PCR Cloning Kitは、プルーフリーディング、耐熱性DNAポリメラーゼで増幅された平滑末端PCR産物の高効率(>80%)クローニングの簡単な方法を提供します。Zero Blunt™ PCRクローニングキットは、多目的クローニングベクターpCR™-BluntおよびExpressLink™ T4 DNA Ligaseを使用して、5分間の室温ライゲーションステップでライゲーション産物を生成します。
The pCR™-Bluntベクターは次のものを提供します: •インサートを切り出すための、PCR産物の挿入部位に隣接するEcoR I部位 • in vitro RNA転写およびシーケンシング用のT7プロモーター/プライマー領域 • シーケンシングまたはPCRスクリーニング用のM13フォワードおよびリバースプライマー領域
Zero Blunt™ PCRクローニングの仕組み Zero Blunt™PCRクローニングキットは、非組み換え体のバックグラウンドが低い平滑PCRフラグメント(または平滑DNAフラグメント)をクローニングするように設計されています。pCR™-Bluntベクターには、LacZαのC末端に融合した致死的な大腸菌ccdB遺伝子が含まれています(Bernard他、1994)。平滑なPCR断片のライゲーションは、形質転換時に陽性組み換え体のみを増殖させるlacZα-ccdB遺伝子融合の発現を阻害します。非組換えベクターを含む細胞は、形質転換混合物をプレーティングする際に死滅します。
キットの構成 Zero Blunt™ PCRクローニングキットにはさまざま構成があります:One Shotあり™ TOPO10化学的コンピテント大腸菌(K2700-20およびK2700-40)、コンピテント細胞なし(K2750-20およびK2750-40)、20反応と40反応のキットサイズがあります。
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
仕様
菌株または酵母株
TOP10
クローニング法
Blunt PCR
フォーマット
キット
製品ライン
Zero Blunt™
製品タイプ
PCRクローニングキット
プロモーター
T7
数量
20反応
ベクター
Blunt DNA クローニングベクター
Unit Size
20 reactions
組成および保存条件
Zero Blunt™ PCRクローニングキットには、線形化 pCR™-Bluntベクター、ExpressLink™ T4 DNAリガーゼ、5X ExpressLink™ T4 DNA リガーゼバッファー、コントロールテンプレート、dNTP、滅菌水、およびM13フォワードおよびリバースプライマーが含まれています。コンピテントセルキット™には、One Shotケミカルコンピテント 大腸菌、S.O.C.培地、およびスーパーコイルコントロールプラスミドが含まれています。
One Shot™大腸菌を-80℃で保管してください。その他のすべての成分を-20°℃で保管してください。すべての試薬は、適切な保管条件であれば、6カ月間安定していることが保証されています。