Zero Blunt™ TOPO™ PCRクローニングキットは、プルーフリーディング耐熱性ポリメラーゼで増幅された平滑末端PCR産物をプラスミドベクターに直接挿入するための、高効率な5分間ワンステップクローニング戦略（「TOPO™クローニング」）を提供します。各キットには、ポジティブセレクション用のccdB遺伝子を含むZero Blunt™ TOPO™ ベクター（図を参照）が含まれており、組換え体によるプラスミドベクターの増殖のみが可能です。Zero™ Blunt™ TOPO™キットは、お客様のニーズと予算に応じて、さまざまなコンピテントセルを使用したものを、またはコンピテントセルなしでご利用いただけます。Zero™ Blunt™ TOPO™ PCR クローニングキットの特長：

迅速かつ簡単—PCRからクローンまでわずか3ステップ、わずか5分のハンズオンタイムで行えます
効率的—正しいインサートを使用して、最大95％のクローンを生成できます
実績—4,000件を超える引用が裏づけるとおり、10年以上にわたり信頼性の高いパフォーマンスを発揮しています
シンプル—リガーゼ、PCR後の処理、特定の配列を含むPCRプライマーは不要です

Zero Blunt™ TOPO™ クローニングキット—概要

ベクター：pCR™Blunt II-TOPO™ ベクター—ccdB遺伝子が含まれており、組換え体の直接選択が可能です

クローニング法：TOPO™クローニング—トポイソメラーゼIベースの、プルーフリーディング耐熱性ポリメラーゼで増幅された平滑末端PCR産物の5分間ライゲーション

コンピテントセル：各種オプション—一般的で高効率なバクテリオファージT1-耐性の、急速に増殖するコンピテントセルを備えたキットから選択するか、ユーザー独自のキットを使用できます。

pCR™ Blunt II-TOPO™ ベクター—プルーフリーディングポリメラーゼ用
pCR™ Blunt II-TOPO™ ベクターは、Platinum™ PfxDNAポリメラーゼなどの耐熱性プルーフリーディングポリメラーゼによって生成された平滑末端PCR産物をクローニングします。pCR™ Blunt II-TOPO™ ベクターには以下が含まれます。

•挿入配列を簡単に切り出すための、PCR生成物挿入部位に隣接したEcoRI部位
•大腸菌での選別用にカナマイシンおよびZeocin™耐性遺伝子の選択が可能
•in vitro RNA転写とシーケンシング用のSP6プロモーター／プライマー領域
•シーケンシングまたはPCRスクリーニング用のM13フォワードおよびリバースプライマー領域

pCR™Blunt II-TOPO™クローンの選択
pCR™-Blunt II-TOPO™ は、致死的な大腸菌遺伝子ccdBの破壊を介して、組換え体を直接選択できます。ベクターには、LacZαフラグメントのC-末端に融合したccdB遺伝子が含まれています。平滑末端PCR産物のライゲーションは、LacZα-ccdB遺伝子融合の発現を阻害し、形質転換時に陽性組み換え体のみを増殖させます。非組換えベクターを含む細胞はプレーティング時に死滅します。そのため、青／白スクリーニングは不要です。

TOPO™ ベースの簡単なクローニング
TOPO™クローニング技術を使用すると、特定の配列を含むPCRプライマー、PCR後の処理、ベクター調製、その他の時間のかかるDNA操作手順は必要ありません。提供されたトポイソメラーゼ荷電ベクターに直接PCR反応を加え、5分間インキュベートして大腸菌コンピテントセルを形質転換するだけです。

効率的なクローニング
目的のインサートを持つクローンを最大95%まで使用することで、スクリーニングするクローンの数を減らし、時間とコストを節約できます。このキットで使用されるpCR™ Blunt II-TOPO™ベクターには致死的なccdB遺伝子が含まれており、耐熱性プルーフリーディングポリメラーゼによって生成される平滑末端PCR組換え体製品を効率的に選択できます。

クローニングの標準製品
TOPO™クローニング技術は、10年以上にわたり数千人の科学者にとって信頼できるパートナーとなっています。高速で使いやすく、効率的なTOPO™クローニングは、さまざまなアプリケーションのために多くの異なるベクターに適用されています。

Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning™ Kitのオプション
Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kitは、平滑末端PCR産物をプラスミドベクターに直接挿入するためのキットであり、さまざまなコンピテントセルとともに購入できます。これらのコンピテントセルは、お客様のニーズに応じてさまざまな利点を提供します：

一般的なクローニング：TOP10細胞（カタログ番号：K2800-20、K2800-40）
高効率のクローニング：TOP10 Electrocomp™細胞（カタログ番号：K2860-01、K2860-40）
一般的なクローニング、バクテリオファージT1耐性：DH5α-T1R（カタログ番号 K2820-20、K2820-40）
迅速な増殖：Mach1™-T1Rの化学的コンピテント大腸菌（カタログ番号：K2830-20）
自作のコンピテントセルを使用：柔軟性を高めながらコスト削減が可能（カタログ番号450254）

当社は、当社は、クリーンでシーケンス対応の組み換えプラスミドの分離に使用するためのPureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit（カタログ（前の文節に統合）