BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kit

BLOCK-iPol™ II miR RNAi Expression Vector Kit は、従来の RNAi ベクターの利点（安定した発現とウイルス導入機能）と、組織特異的発現の機能、および同一の転写産物からの複数の標的ノックダウンを組み合わせたものです。BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi発現キットに含まれる pcDNA™6.2-GW /miR ベクターは、ターゲット配列と100%の相同性を持ち、ターゲットが切断されるように設計された人工 miRNAを発現するように設計されています。このベクターには、より長い Pol II 転写産物（ pre-miRNA）からの遺伝子組み換え miRNA の切除を指示する内因性 miRNA からのフランキングおよびループ配列が含まれます。Invitrogen の受賞歴 のある BLOCK-iT™ RNAi Designer を使用すると、70 % を超えるコンストラクトが 70 % 以上のノックダウンを生成します。遺伝子組み換え miRNA の POL II 発現により、以下のことが可能になります。
o MultiSite Gateway™ の組換えを介して組織特異的またはその他の規制プロモーターを使用するオプションを備えた、CMV 即時早期プロモーターからの強力な発現。
o 遺伝子発現のための Invitrogen の Gateway™ デスティネーション (DEST) ベクターの多くとの互換性。分裂細胞、非分裂細胞、および初代細胞タイプの安定した形質導入のための Lentiviral ベクター、単一部位染色体統合のための Flp-In™ システム、および代替レポーター融合コンストラクトを含みます。
o 同じ転写産物での複数の操作された miRNA の発現。これにより、複数の遺伝子を同時にノックダウンし、合成表現型を生成できます。
使い方。
miR RNAi 配列を高レベルで発現させるために、pcDNA™6.2-GW/miRベクターには CMV プロモーターが含まれています（図1）。無料のオンライン BLOCK-iT™ RNAi Designer に RefSeq アクセッション番号またはヌクレオチド配列を入力するだけで、ソフトウェアは対象のターゲットに 100 % の相同性を持つ最適化された miRNA を設計します。高速ライゲーションプロトコルを使用して miRNA をベクターにクローニングし、直ちに miRNA を発現するためにトランスフェクションします。発現された miRNA は核内の内因性細胞機械（ Drosha を含む）で処理され、その後細胞質に運ばれ、Dicer によってさらに処理されます（図 2）。その後、完全に処理された miRNA が RISC に取り込まれ、そこで siRNA のように機能し、mRNA ターゲットの切断を引き起こします。
さまざまな発現オプションについては、miRNA カセット、miR 側結合領域、および目的のターゲットに相同性の miRNA をさまざまな DEST ベクターに簡単に移動できます。これ は、miRNA カセットが pDONR™ ベクター（ BP 反応）に転写され、選択した DEST ベクター（ LR 反応）に転写される Gateway™ 組換え反応によって起こります。