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GeneRacer™ Kit with SuperScript™ III RT and TOPO TA Cloning™ Kit for Sequencing
GeneRacer™キットは、発現シーケンスタグ（EST）、cDNAサブトラクション、差次的発現、またはライブラリスクリーニングから得られる既知の cDNA配列を使用して、完全長の5'末端および3'末端のcDNAを取得する方法を提供します。このキットでは 詳細を見る
製品番号（カタログ番号） L150201
価格（JPY）/ 1 kit*お問い合わせください ›
価格155,200
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GeneRacer™キットは、発現シーケンスタグ（EST）、cDNAサブトラクション、差次的発現、またはライブラリスクリーニングから得られる既知の cDNA配列を使用して、完全長の5'末端および3'末端のcDNAを取得する方法を提供します。このキットでは、増幅過程で切断されたメッセージを排除することで、完全長の転写物のみを増幅することができます。RACE PCR産物は、シーケンス用Zero Blunt™ TOPO™ PCRクローニングキット（平滑端末PCR産物）またはシーケンシング用TOPO TAクローニング™キット（3'Aオーバーハングを持つPCR産物）を使用して、迅速かつ簡単にクローニングできます。提供されているプロトコルを使用して、1 µgのtotal RNAから、稀少な転写物（30コピー／細胞）や長い転写物（9 kb）のcDNA末端を増幅し、配列を決定することができます。GeneRacer™キットを使用すると、以下のことが可能になります。
•長さ10 kb以上の転写物からcDNAを生成します
•細胞あたり30コピー未満の希少な転写物の完全長の5´末端配列を得ることができます
•完全長の5´末端配列と3´末端配列をクローニングして、完全なcDNA配列を構築します。SuperScript™ III RT
GeneRacer™キット™は、SuperScript III逆転写酵素（RT）と組み合わせて使用でき、長く複雑なmRNAからの完全長の5´末端の増幅効率を改善します。SuperScript™ III RTのRNase H部分は、cDNA合成時にmRNAの切断を防ぐために変異しています。これによりcDNAの長さと収量が向上します。SuperScript™ III RTは、野生型RTよりも熱安定性が高くなっています。これにより、高温での逆転写、複雑なテンプレートの二次構造の緩和、cDNA合成の完了が可能になります。GeneRacer™キットの仕組み
GeneRacer™キットでは、完全長のcDNA末端を含む転写物のみが増幅されます（図参照）。先進的なプロトコルは、5´キャップされたmRNAのみを特異的に標的とすることで、RNAレベルからスタートします。その後のステップでは、キャップが取り除かれ、GeneRacer™ RNAオリゴに置き換えられます。逆転写時に、GeneRacer™ RNAオリゴの配列がcDNAに組み込まれます。完全に逆転写されたcDNAにのみ、この既知の配列が含まれます。GeneRacer™ RNAオリゴ配列に特異的なGeneRacer™ 5´プライマーと遺伝子特異的なプライマーを用いて5´ RACE PCRを行います。その結果、完全長の5´ cDNA配列を含む増幅DNAが得られます。感度と長さ
GeneRacer™キットが完全長の5´ cDNA末端を捕捉できることを実証するために、既知の転写開始部位を持つ遺伝子の5´末端配列を増幅しました。トータルRNAから始めて、GeneRacer™プロトコルに従って、長い転写物（10 kb）と、0.01%または細胞あたり30コピーしか存在しない希少なメッセージの両方が増幅されました（図参照）。
•長さ10 kb以上の転写物からcDNAを生成します
•細胞あたり30コピー未満の希少な転写物の完全長の5´末端配列を得ることができます
•完全長の5´末端配列と3´末端配列をクローニングして、完全なcDNA配列を構築します。SuperScript™ III RT
GeneRacer™キット™は、SuperScript III逆転写酵素（RT）と組み合わせて使用でき、長く複雑なmRNAからの完全長の5´末端の増幅効率を改善します。SuperScript™ III RTのRNase H部分は、cDNA合成時にmRNAの切断を防ぐために変異しています。これによりcDNAの長さと収量が向上します。SuperScript™ III RTは、野生型RTよりも熱安定性が高くなっています。これにより、高温での逆転写、複雑なテンプレートの二次構造の緩和、cDNA合成の完了が可能になります。GeneRacer™キットの仕組み
GeneRacer™キットでは、完全長のcDNA末端を含む転写物のみが増幅されます（図参照）。先進的なプロトコルは、5´キャップされたmRNAのみを特異的に標的とすることで、RNAレベルからスタートします。その後のステップでは、キャップが取り除かれ、GeneRacer™ RNAオリゴに置き換えられます。逆転写時に、GeneRacer™ RNAオリゴの配列がcDNAに組み込まれます。完全に逆転写されたcDNAにのみ、この既知の配列が含まれます。GeneRacer™ RNAオリゴ配列に特異的なGeneRacer™ 5´プライマーと遺伝子特異的なプライマーを用いて5´ RACE PCRを行います。その結果、完全長の5´ cDNA配列を含む増幅DNAが得られます。感度と長さ
GeneRacer™キットが完全長の5´ cDNA末端を捕捉できることを実証するために、既知の転写開始部位を持つ遺伝子の5´末端配列を増幅しました。トータルRNAから始めて、GeneRacer™プロトコルに従って、長い転写物（10 kb）と、0.01%または細胞あたり30コピーしか存在しない希少なメッセージの両方が増幅されました（図参照）。
研究用途にのみご使用ください。診断目的には使用できません。
仕様
菌株または酵母株TOP10
クローニング法TOPO TA
フォーマットキット
使用対象（アプリケーション）逆転写
内容GeneRacerモジュール：2 x 1.5 mL滅菌水、24 μL RnaseOut、各6 μLの子ウシ腸ホスファターゼ（CIP）、CIPバッファー、タバコ酸ピロホスファターゼ（TAP）、10X TAPバッファー、T4 RNAリガーゼ、10X T4 RNAリガーゼバッファー、および10 mm ATP、6 x 250 ng GeneRacer RNAオリゴ、2 x 1 mLフェノール／クロロホルム、36 μLイガイグリコーゲン、200 μL 酢酸ナトリウム（3M）、各225 μL GeneRacer 5'プライマー、 5'ネストプライマー、3'プライマー、および3'ネストプライマー、20μL コントロールHeLaトータルRNA（500 ng/μL）、各15 μLのコントロールプライマーAおよびコントロールプライマー B.1、SuperScript III RT モジュール：μ6 L SuperScript III逆転写酵素（200 U/μL）、24 μL 5Xファーストストランドバッファー、15 μL DTT（0.1 M）、6 μL RNaseH（2 U/μL）、6 μL ランダムプライマー（100 ng/μL）、6 μL GeneRacerオリゴDTプライマー（ 900 ng/μL）、6 μL dNTPミックス（各10 mM）、10 S.N.A.P.カラム、シーケンシング用TOPO TAクローニングキット（-20℃）、十分な試薬、ワンショットTOP10ケミカルコンピテント大腸菌
製品ラインGeneRacer™、SuperScript™、TAクローニング™、TOPO™
製品タイプCloning Kit
数量1キット
ベクターpCR4-TOPO TA
Unit Size1 kit*
組成および保存条件
各モジュールは、以下の指示通りに保存してください：
GeneRacer™モジュール（-20℃）：
•2 × 1.5 ml滅菌水
• 24 µl RnaseOut™
•各6 µlの子ウシ腸ホスファターゼ（CIP）、CIPバッファー、タバコ酸ピロホスファターゼ（TAP）、10XTAPバッファー、T4 RNAリガーゼ、10X T4 RNAリガーゼバッファー、10X T4 RNAリガーゼバッファー、および10 mm ATP
• 6 × 250 ng GeneRacer™ RNAオリゴ
• 2 × 1 ml フェノール／クロロホルム
• 36 µlイガイグリコーゲン
• 200 µl 酢酸ナトリウム（3 M）
• 各225 µlのGeneRacer™ 5′プライマー、5′ネストプライマー、3′プライマー、および3′ネストプライマー
• 20 µLコントロールHeLaトータルRNA（500 ng/µl）
•各15 µlのコントロールプライマーAおよびコントロールプライマー B.1
SuperScript™ III RTモジュール（-20℃）
• 6 µl SuperScript™ III逆転写酵素（200 U/µｌ）
• 24 µl 5Xファーストストランドバッファー
• 15 µl DTT（0.1 M）
• 6 µl RNaseH（2 U/µｌ）
• 6 µl ランダムプライマー（100 ng/µｌ）
• 6 µl GeneRacer™オリゴDTプライマー（900 ng/µl）
• 6 µl dNTPミックス（各10 mm）
10 S.N.A.P.™カラム（室温）
、シーケンシング用TOPO TA Cloning™キット（-20℃）
• 十分な試薬およびOne Shot™ TOP10ケミカルコンピテント大腸菌（-80℃で保存）により、10のGeneRacer™ PCR産物をクローニング；GeneRacerモジュール（-20℃）、SuperScript III RTモジュール（-20℃）、コンピテント大腸菌（-80℃で保存）、S.N.A.P.カラム（室温）、シーケンシング用TOPO TAクローニングキット（-20℃）
GeneRacer™モジュール（-20℃）：
•2 × 1.5 ml滅菌水
• 24 µl RnaseOut™
•各6 µlの子ウシ腸ホスファターゼ（CIP）、CIPバッファー、タバコ酸ピロホスファターゼ（TAP）、10XTAPバッファー、T4 RNAリガーゼ、10X T4 RNAリガーゼバッファー、10X T4 RNAリガーゼバッファー、および10 mm ATP
• 6 × 250 ng GeneRacer™ RNAオリゴ
• 2 × 1 ml フェノール／クロロホルム
• 36 µlイガイグリコーゲン
• 200 µl 酢酸ナトリウム（3 M）
• 各225 µlのGeneRacer™ 5′プライマー、5′ネストプライマー、3′プライマー、および3′ネストプライマー
• 20 µLコントロールHeLaトータルRNA（500 ng/µl）
•各15 µlのコントロールプライマーAおよびコントロールプライマー B.1
SuperScript™ III RTモジュール（-20℃）
• 6 µl SuperScript™ III逆転写酵素（200 U/µｌ）
• 24 µl 5Xファーストストランドバッファー
• 15 µl DTT（0.1 M）
• 6 µl RNaseH（2 U/µｌ）
• 6 µl ランダムプライマー（100 ng/µｌ）
• 6 µl GeneRacer™オリゴDTプライマー（900 ng/µl）
• 6 µl dNTPミックス（各10 mm）
10 S.N.A.P.™カラム（室温）
、シーケンシング用TOPO TA Cloning™キット（-20℃）
• 十分な試薬およびOne Shot™ TOP10ケミカルコンピテント大腸菌（-80℃で保存）により、10のGeneRacer™ PCR産物をクローニング；GeneRacerモジュール（-20℃）、SuperScript III RTモジュール（-20℃）、コンピテント大腸菌（-80℃で保存）、S.N.A.P.カラム（室温）、シーケンシング用TOPO TAクローニングキット（-20℃）