Thermo Scientific pUC18ベクターは、コピー数が多い小さな大腸菌プラスミドであり、長さは2686 bpです。pUC19ベクターと同一のマルチクローニングサイト(MCS)を持ちますが、配列の方向は逆です。
特長• 独自の特許技術を用いてクロマトグラフィーで精製
• 超らせん型のものが90%を上回る
• 大腸菌(
dam+、
dcm+)から単離
• pUC18 DNA配列、pUC19 DNA配列、配列解析、およびマップ作成については、
無料のREviewerオンラインツールをご覧ください。
アプリケーション• クローニング
• インサートDNA、pUC18 DNAのシーケンシング:DNA分子量標準の調製
pUC18/19プラスミドの内容と使用上の注意 - pUC18/19プラスミドの内容:• プラスミドを複製するpMB1レプリコン
rep(ソース – プラスミド
pBR322)。pUCプラスミドのコピー数が多いのは、
rop遺伝子が存在しないことと、pMB1のレプリコン
repの単一点突然変異が原因です。
•β‐ラクタマーゼのコード化を行う
bla遺伝子は、アンピシリンに対する耐性を与えます(ソース – プラスミドpBR322)。二点突然変異である点がpBR322とは異なります
• 大腸菌の
lacオペロン領域は、CAPタンパク質結合部位、プロモーターP
lac、
lacリプレッサー結合部位、および
lacZ遺伝子の5’-末端部を含み、β-ガラクトシダーゼのN末端フラグメントをコード化します(ソース – M13mp18/19)。このフラグメントの合成はIPTGによる誘発が可能で、宿主によってコード化されたβ-ガラクトシダーゼの不完全な形態(変異デルタ
(lacZ)M15)により、遺伝子座内(α)で補完できます。IPTGが存在する場合、細菌は酵素の両方のフラグメントを合成し、X-Galを持つ培地上に青色のコロニーを形成します。
lacZ遺伝子内にあるMCSにDNAを挿入すると(
lacZのコドン6-7はMCSによって置き換えられます)、β-ガラクトシダーゼのN末端フラグメントが不活性化し、α補完が行われなくなります。そのため、組換えプラスミドを持つ細菌は白色のコロニーを生じます。
このマップは、pUC18 DNAを1回切断する酵素を示しています。Thermo Scientificが製造した酵素はオレンジ色で示されています。座標は、各認識配列における最初のヌクレオチドの位置を示します。
遺伝因子の正確な位置をマップに示します(終止コドンを含む)。シグナルペプチドの
bla遺伝子ヌクレオチド2486-2418(相補鎖)コード。wt β-ガラクトシダーゼに対応し、青/白コロニースクリーニングに不可欠なLacZポリペプチドは、nt位置236(相補鎖)で終了します。同じ読み取りフレーム内のその他30個のコドンは、pBR322に由来します。示されている
rep領域は、複製を促進するのに十分です。DNA複製は866(± 1)の位置で開始し、指示された方向に進みます。pMB1およびColE1レプリコンを持つプラスミドは適合しませんが、p15Aレプリコン(pACYC177、pACYC184)を持つプラスミドは完全に適合します。pMB1由来のプラスミドは、クロラムフェニコールを使用して増幅できます。
関連製品pUC19 DNApUC57 DNAFor Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.