従来のpcDNA™5/FRTベクターに加えて、Flp-In™システムでのクローニングと発現に、4種類のFlp-In™発現ベクターであるpcDNA5/FRT/V5-His-TOPO™、pSecTag/FRT/V5-His-TOPO™、pEF5/FRT/V5-DEST™、およびpEF5/FRT/V5-D-TOPO™（図1）を使用できます。これらのベクターは、さまざまなクローニングオプションとさまざまなプロモータータイプを提供します。ベクターには以下の特長があります。

•Flp-In™ Cell Linesへの効率的な統合のためのFlpリコンビナーゼターゲット（FRT）部位
• 一体型の便利な選択のためのヒグロマイシン耐性遺伝子
• 抗V5抗体での融合タンパク質の簡単な検出のためのC末端V5タグ
• ニッケルキレート樹脂上の融合タンパク質の迅速な浄化のための6xHisタグ（pcDNA5/FRT/V5-His-TOPO™ベクターおよびpSecTag/FRT/V5-His-TOPO™ベクターのみ）

すべてのベクターは高レベルのCMVプロモーターまたはEF-1αプロモーターを備えています。さらに、pSecTag/FRT/V5-His-TOPO™には、組換えタンパク質の分泌のためのIgκリーダー配列が含まれています。

エントリーオプション
pcDNA™5/FRTは、制限酵素介在性クローニングに最適です。他の4種類のFlp-In™発現ベクターは、Flp-In™発現ベクターへのクローニングのための時間を節約する2種類のオプションを提供します。
•5分間のTOPO™クローニング

pcDNA™5/FRT/V5-His Expression KitおよびpSecTag/FRT/V5-His TOPO™ TA Expression Kitでは、Flp-In™発現ベクターへのTaq増幅PCR産物の5分間での直接クローニングを行えます。pEF5/FRT/V5 Directional TOPO™ Expression Kitでは、プルーフリーディング酵素で生成されたPCR産物の5分間の特定部位クローニングを行えます。Directional TOPO™クローニングを使用すると、結果のクローンの>90 %が正しい発現方向にあるため、コロニースクリーニングにかかる時間が短縮されます。
•Gateway™ベクターへの簡単な組換え

pEF5/FRT/V5-DEST™ベクターにはGatewayテクノロジー™との互換性があるため、目的の遺伝子を異なるベクターまたは宿主システムに簡単に移行できます。迅速で効率的なGateway™組換え反応を複数のデスティネーションベクターで同時に実行できるため、複数のシステムでの作業時間を短縮できます。

プロモーターの選択肢
Flp-In™発現ベクターは、CMVプロモーターまたはEF-1αプロモーターで使用できます。pEF5/FRT/V5-DEST™ベクター およびpEF5/FRT/V5-D-TOPO™ベクターには、目的の遺伝子の発現を促進するヒトEF-1Éプロモーターが含まれています。EF-1αプロモーターは、CMVプロモーター発現が存在しない場合や、または一貫性がない場合など、幅広い哺乳類細胞タイプで発現します。このプロモーターは一部の細胞タイプでの長期的な遺伝子発現に適している場合があり、BHKおよび既成の3T3のFlp-In™ Cell Linesでの発現に推奨されています。pcDNA5/FRT/V5-His-TOPO™およびpSecTag/FRT/V5-His-TOPO™ベクターは、ほとんどの細胞タイプにおける目的の遺伝子の高レベルでの構造的発現のためのCMVプロモーターを有します。