Click-iT™ Plus EdU Pacific Blue™ Durchflusszytometrie-Assay-Kit
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Click-iT™ Plus EdU Pacific Blue™ Durchflusszytometrie-Assay-Kit

Das Click-iT™ Plus EdU Pacific Blue ™ Durchflusszytometrie-Assay-Kit ist ein einfacher, stabilerer Assay für die Analyse der DNA-Replikation in proliferierendenWeitere Informationen
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Das Click-iT™ Plus EdU Pacific Blue ™ Durchflusszytometrie-Assay-Kit ist ein einfacher, stabilerer Assay für die Analyse der DNA-Replikation in proliferierenden Zellen im Vergleich zu herkömmlichen BrdU-Methoden. Neu synthetisierte DNA wird mit dem 405 nm-Laser des Durchflusszytometers analysiert. Die Click-iT™ Plus-Formulierung ist kompatibel mit standardmäßigen Fluorophoren, einschließlich R-PE-und R-PE-Tandems, sowie fluoreszierenden Proteinen.

• Multiplexfähig – kompatibel mit R-PE (und Tandems) und fluoreszierenden Proteinen
• Präzise – hervorragende Ergebnisse im Vergleich zu BrdU-Assays
• Schnell – Ergebnisse schon nach 90 Minuten

Auswahlhilfe für alle Click-iT™ EDU- und Click-iT™ Plus EDU-Assays für die Durchflusszytometrie anzeigen.

Multiplexfähig
Die Click-iT Plus-Formulierung bietet eine höhere Multiplex-Fähigkeit als die ursprünglichen Click-iT™ EdU Durchflusszytometrie-Assays. Click-iT™ Plus EDU-Assays können in Verbindung mit R-PE- und R-PE-Tandems und fluoreszierenden Proteinen, sowie GFP und mCherry verwendet werden, und das ohne Verlust der Genauigkeit oder Geschwindigkeit der ursprünglichen Click-iT™ EdU-Assays.

Eine fortschrittliche Methode, die bessere Ergebnisse als BrdU liefert
Die genaueste Methode der Proliferationsanalyse ist die direkte Messung der DNA-Synthese. Ursprünglich wurde dies mit der Einbindung radioaktiver Nukleoside durchgeführt. Diese Methode wurde durch die Antikörper-basierte Erkennung des Nukleosid-Analogons Bromdesoxyuridin (BrdU) ersetzt. Das Click-iT™ Plus EdU Durchflusszytometrie-Assay ist eine neuartige Alternative zum BrdU-Assay. EdU (5-Ethynyl-2´-Deoxyuridin) ist ein Thymidin-Analogon und wird während der aktiven DNA-Synthese in die DNA eingebunden. Die Erkennung beruht auf Klick-Chemie, einer Kupfer-katalysierten kovalenten Reaktion zwischen einem Azid und einem Alkin. In dieser Anwendung befindet sich das Alkin auf der Ethynylverbindung der EdU, während das Azid mit dem Alexa Fluor™ Farbstoff gekoppelt ist. Standardmethoden der Durchflusszytometrie werden zur Bestimmung des prozentualen Anteils der S-Phase-Zellen in der Population verwendet.

Unter Bedingungen ist die Verwendung mit Zellzyklus-Farbstoffen und Antikörpern möglich
Die geringe Größe des Farbstoff-Azids ermöglicht den effizienten Nachweis der einbezogenen EdU unter milden Bedingungen, während die standardmäßige Aldehyd-basierte Fixierung und Lösungsmittelpermeabilisierung für das Click-iT™ Plus Detektionsreagenz ausreichend sind, um Zugang zur DNA zu erhalten. Dies steht im Gegensatz zu BrdU-Assays, die eine Denaturierung der DNA (mit HCI, Wärme oder Verdauung mit DNase) zur Exposition des BrdU erfordern, so dass es mit einem anti-BrdU-Antikörper nachgewiesen werden kann. Probenverarbeitung für das BrdU-Assay kann zu Signalveränderungen in der Zellzyklus-Verteilung sowie Zerstörung der Antigenerkennungsstellen führen, wenn die HCl-Methode verwendet wird. Im Gegensatz dazu ist das anwenderfreundliche Click-iT™ Plus EdU-Assay mit Zellzyklus-Farbstoffen kompatibel. ™ Das Click-iT Plus EdU-Assay kann auch mit Antikörpern gegen Oberflächen- und intrazelluläre Marker sowie gegen mit Standard-Fluorophoren markierte Konjugate, einschließlich R-PE, R-PE-Tandems und fluoreszierender Proteine (GFP und mCherry), gebündelt werden.

Schnelles und einfaches Protokoll
Das Click-iT™ Plus EDU-Protokoll basiert auf den Aldehydfixierungs- und Lösungsmittelpermeabilisierungsschritten zur immunhistochemischen Antikörper-Markierung. Jedoch ist EdU mit anderen Fixierungs-/Permeabilisierungswirkstoffen, einschließlich Saponin und Methanol, kompatibel. Nur fünf Arbeitsgänge sind zur Vorbereitung Ihrer Zellproliferationsdaten-Analyse erforderlich:
1. Behandlung von Zellen mit EdU.
2. Fixieren und Permeabilisieren von Zellen.
3. Nachweis von S-Phase-Zellen mit Click-iT™ Plus Nachweis-Cocktail für die Dauer von 30 Minuten.
4. Einmal waschen.
5. Analysieren.
Ergebnisse stehen unter bestimmten Umständen bereits nach 60 Minuten zur Verfügung, wir empfehlen jedoch 90 Minuten für alle Anwendungen.
Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.
Specifications
NachweisverfahrenFluoreszent
FarbstofftypPacific Blue™
FormatRöhrchen
Menge50 assays
VersandbedingungRaumtemperatur
Emission404⁄450
Zur Verwendung mit (Anwendung)Durchflusszytometrie
Zur Verwendung mit (Geräte)Durchflusszytometer
ProduktlinieClick-iT™
ProdukttypDurchflusszytometrie-Assaykit
Unit SizeEach
Inhalt und Lagerung
Enthält EdU (5-Ethynyl-2‘-Deoxyuridin), Pacific Blue™ Picolylazid, wasserfreies Dimethylsulfoxid (DMSO), Click-iT™ Fixiermittel, Click-iT™ saponin-basierten Permeabilisierungs- und Waschpuffer, Kupferschutzmittel und Click-iT™ EdU-Pufferadditiv.
  • Bei 2 bis 8 °C lagern
  • Mit Trockenmittel und vor Licht geschützt lagern.
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    Häufig gestellte Fragen (FAQ)

    What are the main characteristics of a Click-iT reaction?

    Click reactions have several general characteristics: the reaction is efficient, no extreme temperatures or solvents are required, the reaction is complete within 30 minutes, the components of the reaction are bio-inert, and perhaps most importantly, no side reactions occur-the label and detection tags react selectively and specifically with one another. This final point is a key advantage of this powerful detection technique; it is possible to apply click chemistry-labeled molecules to complex biological samples and detect them with unprecedented sensitivity due to the extremely low background of the reaction.

    Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

    I will be performing a cell proliferation assay using Click-iT EdU kit. At what point can I stop overnight, or do I have to perform all the steps continuously?

    One may store the sample after fixation overnight in PBS at 4oC. For longer storage (<1 week) , store in buffer with 1-2% formaldehyde or in formalin to limit microbial growth. If you use sodium azide as a microbial inhibitor, it must be completely removed prior to the Click-iT reaction.

    Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Viability, Proliferation, Cryopreservation, and Apoptosis Support Center.

    Can I combine Click-iT or Click-iT Plus reactions with phalloidin conjugates used for actin staining?

    We do not recommend using phalloidin conjugates for staining actin in combination with traditional Click-iT or Click-iT Plus reactions since phalloidin is extremely sensitive to the presence of copper.

    For staining actin in combination with traditional Click-iT or Click-iT Plus reactions, we recommend using anti-α-actin antibodies for staining actin in the cytoskeleton. You can find a list of our actin antibodies here.

    Another option would be to use the Click-iT Plus Alexa Fluor Picolyl Azide Toolkit (Cat. Nos. C10641, C10642, C10643). These Click-iT Plus toolkits provide Copper and Copper protectant separately which makes it easier to titrate the copper concentration to obtain optimal labeling with minimal copper-mediated damage. You may need to optimize the click reaction with the lowest possible concentration of copper and then perform the phalloidin staining.

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    With the Click-iT Plus EdU flow cytometry kits, my live-cell sample includes EDTA in the buffer/medium. Would this cause any problems with EdU incorporation or the click reaction?

    The presence of EDTA in the cell buffer/media would not be an issue for EdU incorporation and it should be mostly gone from the sample after fixation and permeabilization. EDTA must not be present during the click reaction.

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    With the Click-iT Plus EdU flow cytometry kits, I am seeing three distinct peaks in my histogram instead of two peaks. What may be the reason for this?

    The middle peak would most likely be from EdU-incorporated cells that have divided, each daughter cell receiving roughly half the incorporated EdU. To avoid this, we recommend shortening the incubation time of EdU with the cells.

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    Abbildungen

    Dokumente und Downloads

    Zertifikate

    Chargen-Nr.Certificate TypeDateCatalog Number(s)
    3148811Certificate of Analysis30. März 2025C10636
    2845254Certificate of Analysis18. Juni 2024C10636
    2790090Certificate of Analysis22. Nov. 2023C10636
    2575946Certificate of Analysis03. Apr. 2023C10636
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    Informationen zu Lizenzbestimmungen

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    Limited Use Label License No. 402: Nucleic acid labeling and detection
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    Zitierungen und Referenzen (1)

    Zitierungen und Referenzen
    Abstract
    Intratumoural heterogeneity generated by Notch signalling promotes small-cell lung cancer.
    Authors:Lim JS, Ibaseta A, Fischer MM, Cancilla B, O'Young G, Cristea S, Luca VC, Yang D, Jahchan NS, Hamard C, Antoine M, Wislez M, Kong C, Cain J, Liu YW, Kapoun AM, Garcia KC, Hoey T, Murriel CL, Sage J,
    Journal:Nature
    PubMed ID:28489825
    'The Notch signalling pathway mediates cell fate decisions and is tumour suppressive or oncogenic depending on the context. During lung development, Notch pathway activation inhibits the differentiation of precursor cells to a neuroendocrine fate. In small-cell lung cancer, an aggressive neuroendocrine lung cancer, loss-of-function mutations in NOTCH genes and the ... More
    1 total citations

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