in situアポトーシス検出用のClick-iT Plus TUNEL Alexa Fluor 488、594、および647アッセイは、小、高特異性標識の部分と明るい蛍光色素を組み合わせることで、組織および培養細胞サンプル中のアポトーシス細胞の検出を可能にします。標識の部分をDNA断片に組み込んだ後、GFPまたはRFPから放出される蛍光シグナルを保存するために十分な穏やかな条件を用いて、触媒的な「クリック」反応により検出を行います。

Click-iT Plus TUNEL Assay for In Situ Apoptosis Detectionでは、さらに以下の利点が得られます：
• 組織サンプルまたは細胞サンプル中のアポトーシス細胞の検出に最適化
• マルチプレックスにより、GFPやRFPなどの蛍光色素や蛍光タンパク質との併用に最適化
• 改良されたTUNEL Assay—反応部位が小さいため、ラベルの取り込みが容易
•明るいアポトーシス性シグナル—Alexa Fluor色素により、反応性の強い明るい光標識が小さく、安定した非光退色蛍光シグナル
• 柔軟性—一度に1～50サンプルを検査するようアッセイを構成

細胞DNAの断片化がアポトーシスの特徴。TUNELアッセイは、アポトーシス細胞中または組織サンプルの断片化DNAを検出するためにもっとも広く使用されている方法です。TUNELアッセイは、断片化されたDNAの3’-OH末端に修飾dUTPを組み込むことから始まります。dUTP修飾は多くの場合、蛍光色素分子の付加であることが多いです。蛍光色素分子サイズにより、修飾dUTPは予想される取り込み速度よりも低く表示されることがあり、これがTUNELアッセイ感度に影響を与える可能性があります。さらに、現在市販されているTUNELアッセイキット向け蛍光色素の多くには、光退色や蛍光スペクトルのオーバーラップの問題があり、いずれもアッセイの感度と多重化能力を低下させます。

Click-iT Plus TUNELアッセイは、こうした問題を解消するために開発されました。このアッセイでは、ヌクレオチドがより容易に取り込まれるようにするアルキン基（小さな生体直交性官能基）で修飾されたdUTPを使用します。取り込み後、アルキン基とAlexa Fluorピコリルアジド蛍光色素の間で高度に特異的なクリック反応が起こり、その後にその色素が検出されます。これにより、アポトーシス細胞を検出するための高感度かつ特異的なアッセイが可能となります。Click-iT Plus TUNELアッセイは反応条件が穏やかなため、蛍光タンパク質または色素によるマルチプレックスを可能にします。

Click-iT Plus TUNELアッセイは、さまざまなホルマリン固定パラフィン包埋組織タイプでバリデーション済みです。いずれの場合も、蛍光タンパク質および蛍光色素でのマルチプレックス能力が保持されていました。さらに、蛍光標識ファロイジンを使用してアクチンを染色する能力も保持されました。

Click-iT Plus TUNELアッセイには、組織サンプルまたは細胞サンプルからアポトーシス細胞を検出するために必要なすべての試薬が含まれています。このキットに含まれる試薬は、50サンプルの検査に使用でき、一度に1～50サンプルの検査を行うように構成できます。