Premo Autophagyセンサーは、オートファジー関連タンパク質であるLC3Bまたはp62をGFPまたはRFPとともに利用し、細胞におけるオートファジーの誘導または阻害を検出します。Premo Autophagyセンサーは、BacMam（哺乳類プロモーターを含む昆虫バキュロウイルス）技術によって形質導入されており、オートファゴソーム内のキメラタンパク質を明瞭に視覚化できます。BacMam試薬は哺乳類細胞では複製しないため、安全に取り扱うことができます。また、細胞毒性もなく、すぐに使用できます。発現ベクターとは異なり、滴定の可能なBacMam試薬は再現性のある発現を可能にし、効率性の高い共導入を実現します；このため、同一細胞に複数のBacMam試薬を簡単に使用できます。新たに改良されたBacMamシステムは、実施の容易なワンステッププロトコルにより、神経細胞や神経幹細胞（NSC）を含む、幅広い種類の細胞を対象とした効率的な形質導入を行えます。オートファジーを視覚化するには、BacMam Autophagy Sensorを細胞に追加し、一晩インキュベートしてタンパク質を発現させた後に、機器の標準的なGFPおよび／またはRFP蛍光設定を使用してシグナルを検出します。

LC3Bタンパク質は、オートファジーにおいて重要な役割を果たします。通常、このタンパク質はサイトゾルに存在しますが、リン酸化ジルエタノールアミンによる開裂およびリピド化後、LC3Bがファゴフォアを関連付けます。この局所化は、オートファジー膜の一般的なマーカーとして使用できます。p62タンパク質は、ビチクチン結合タンパク質の1つで、シークストーム（SQSTM1）としても知られており、細胞オートファジー機構によって分解されるカーゴの受容体として機能します。オートファジーが誘導されると、p62タンパク質はオートファゴソームに局所化され、その後分解されます。逆に、オートファジーが阻害されると、p62タンパク質はオートファゴソームに蓄積します。このように、p62-蛍光タンパク質キメラの細胞内局在化は、オートファジーの誘導および阻害の有用なマーカーとして機能します。

さらに、酸に敏感なGFP（Emerald GFP）と酸に影響されないRFP（TagRFP）をタンデムセンサーRFP-GFP-LC3Bに組み合わせると、オートファゴソーム（中性pH）からオートリソソーム（酸性pH）への変化が起こります。これは、リソソーム融合後のオートファゴソームの酸性化時にGFP蛍光の特異的損失をイメージングすることで視覚化できます。Premo Tandem Autophagy Sensorは、オートファジーを誘導するとオートファゴソームを正確に標識します。これらの構造はGFPとRFPの両方に対して陽性となります。リソソームが融合すると、pHが低下し、GFPがクエンチされるほか、自動リソソームが赤色に見えます。さらに、Premo Autophagy Tandem Sensorと遠赤発光LysoTracker Deep Red（別売）を組み合わせることで、オートファゴソーム／オートリソーム／リソソームダイナミクスの3色分析が可能となります。

各Premo Autophagyアッセイキットには、オートファジーを阻害するネガティブコントロールとして亜塩素酸二リン酸塩が含まれます。

Premo Autophagyアッセイを使用する利点
• マルチプレックス対応 — Premo Autophagy Tandem Sensorと遠赤発光LysoTracker Deep Redを組み合わせることで、完全な自己増殖経路ダイナミクスの3色分析が可能
• 高効率な導入システム —初代細胞、幹細胞、神経などの広範囲な哺乳類細胞株の90%超の導入が可能
• 高速かつ利便 — Premo Autophagy試薬を細胞に加え、一晩インキュベートした後に画像化する、または凍結保存し、後に使用するアッセイ用に準備可能
• 堅牢 — Premo Autophagy試薬は、哺乳類細胞で非複製であり、観察可能な細胞質効果がなく、バイオセーフティレベル（BSL）1プロトコルに適しています
• 複数の構成：— Premo Autophagyセンサーは、以下のキメラ構成でご利用になれます：
P36235：LC3B-GFP；コントロールLC3B（G120A）-GFP；P36236：LC3B-RFP；コントロールLC3B（G120A）-RFP；P36239：RFP-GFP-LC3B；P36240：GFP-p62；P36241：RFP-p62