Kit de cuantificación de biotina con fluorescencia Pierce™

El kit de cuantificación de la biotina de fluorescencia Thermo Scientific Pierce solo requiere diez microlitros de muestra para medir con precisión el nivel de biotinilación de los anticuerpos etiquetados y otras biomoléculas.

Características del kit de cuantificación de la biotina de fluorescencia:

• Rápido: requiere solo cinco minutos de incubación
• Económico: requiere solo 10 µl de muestra (aproximadamente 750 ng de IgG biotinilada)
• Sensible: intervalo de trabajo lineal de 10 a 60 picomoles de biotina

Este ensayo de biotina basado en microplacas es fácil de realizar; basta con añadir el indicador fluorescente suministrado a las muestras biotiniladas y a los patrones de biocitina diluidos. La avidina fluoresce cuando la biotina desplaza al HABA (ácido 4'-hidroxiazobenceno-2-carboxílico), que interactúa débilmente. La cantidad de biotina se determina comparando la fluorescencia de la muestra con la curva estándar de biocitina. Este ensayo requiere menos volumen de muestra que el ensayo HABA colorimétrico de microplacas y es mucho más sensible.

Incluye
Tampón de ensayo, solución de indicador fluorescente HABA-avidina y control de biocitina

Requiere
Microplaca negra opaca de 96 pocillos y lector de placas de fluorescencia (excitación de 494 nm; emisión de 520 nm)

La interacción altamente específica de la avidina o estreptavidina con la biotina es la base de muchos sistemas de purificación y detección. Es necesario cuantificar el grado de biotinilación para evaluar si un procedimiento de etiquetado de biotina ha tenido éxito y qué cantidad de molécula biotinilada se debe utilizar para una aplicación específica.

El HABA (ácido 4'-hidroxiazobenceno-2-carboxílico) es un colorante que interactúa débilmente con la avidina y se utiliza habitualmente en ensayos colorimétricos para estimar rápidamente la relación biotina-proteína. El kit de cuantificación de la biotina de fluorescencia también utiliza colorante HABA, pero es más sensible y preciso. A la solución que contiene la muestra biotinilada se añade una premezcla de avidina fluorescente con HABA (indicador DyLight). Debido a su mayor afinidad con la avidina, la biotina desplaza al HABA, permitiendo que la avidina fluorezca. La cantidad de biotina se mide en una microplaca comparando la fluorescencia con una curva estándar de biocitina.

El kit de cuantificación de la biotina de fluorescencia solo requiere 10 µl de muestra. En comparación, el método colorimétrico tradicional requiere 100 µl de muestra y el kit de ensayo fluorescente de otro proveedor líder requiere 50 µl de muestra. Nuestro kit es más preciso que el ensayo de biotina fluorescente de otros proveedores (marca I).