KingFisher Systeme wurden für eine breite Palette von Anwendungen entwickelt, über Nukleinsäuren, Proteine und Peptide bis hin zu Zellen und Exosomen.

 

Je nach Probentyp und Anwendung sind unterschiedliche Materialien und Chemikalien zur Extraktion des Analyten erforderlich. Blut-, Speichel- und Wangenabstrichproben sind z. B. konzentrierte Quellen langer DNA-Fragmente, während Proben mit zellfreier DNA großvolumige und gleichzeitig niedrig konzentrierte Quellen für kurze Fragmente darstellen. Um DNA aus diesen Quellen optimal zu extrahieren, bedarf es verschiedener Beads sowie unterschiedlicher Binde- und Pufferreagenzien.

 

In diesem Abschnitt finden Sie Kits, Reagenzien und Protokolle, die für KingFisher Geräte optimiert sind und zur Maximierung der Reinheit und Ausbeute für jedes Extraktionsziel und jeden Probentyp beitragen. Die Tabelle fasst die empfohlenen Methoden für die einzelnen Analyten und Anwendungen zusammen.

Die MagMAX Kits sind die Reagenzien der Wahl für die automatisierte Extraktion von DNA oder RNA mit KingFisher Systemen.



Auswahlhilfe für Kits, Reagenzien und Protokolle

Verwenden Sie unsere Auswahlhilfe, um das richtige Magnetbead-Kit für Ihre automatisierte Probenvorbereitung zu finden. MagMAX, Dynabeads und SMART Digest Kits können für die Aufreinigung von Nukleinsäuren, Proteinen, Zellen, Exosomen und Viren aus einer Vielzahl von Probentypen eingesetzt werden und sind für automatisierte KingFisher Aufreinigungssysteme optimiert. 

Go directly to our Kit, Reagent, and Protocol Selection Guide


Herunterladen von Protokollen

Die KingFisher BindIt oder BindIx Software wird kostenlos mit allen KingFisher Geräten geliefert, sodass Sie Protokolle für Ihre Anwendungen erstellen, herunterladen, ausführen, ändern und speichern können. Mit der Software können Sie Schritte, Parameter, Platten und Reagenzien für jeden Abschnitt (Binden, Waschen und Eluieren) Ihres Protokolls definieren und bearbeiten.

 

Klicken Sie in der Auswahlhilfe für Kits, Reagenzien und Protokolle unter den entsprechenden MagMAX oder Dynabeads Kits oder Reagenzien auf View Protocols (Protokolle anzeigen), um automatisierte Protokolle für KingFisher Geräte einzusehen. Folgen Sie dann diesen Schritten, um die gewünschten Protokolle herunterzuladen und zu installieren.

KingFisher BindIx Software (für KingFisher Apex Systeme)

KingFisher BindIt Software (für KingFisher Flex und Duo Prime Systeme)

  1. Stellen Sie sicher, dass die BindIt Software Version 4.1 auf dem Computer installiert ist, den Sie mit Ihrem KingFisher Gerät verwenden. Laden Sie die aktuellste BindIt Software hier herunter.
  2. Suchen Sie in der Auswahlhilfe für Kits, Reagenzien und Protokolle das gewünschte Kit und klicken Sie auf View Protocols (Protokolle anzeigen). Die Produktseite für dieses Kit wird angezeigt.
  3. Scrollen Sie nach unten zum Abschnitt mit den Protokollen und klicken Sie auf das Protokoll, das Sie herunterladen möchten. Achten Sie darauf, dass es für das richtige Gerät ist.
  4. Speichern Sie das Protokoll auf Ihrem Computer im bevorzugten Ordner.
  5. Schließen Sie Ihren PC über ein USB-Kabel an Ihr KingFisher Gerät an und wählen Sie in der BindIt Software Home (Startseite) > Connect (Verbinden).
  6. Sie können das Protokoll über die BindIt Software starten oder auf das Gerät übertragen. Wenn Sie das Protokoll übertragen möchten, wählen Sie Home (Startseite) > Transfer in BindIt Software (Übertragen in die BindIt Software).
  7. Wählen Sie Upload (Hochladen) und suchen Sie das gespeicherte Protokoll. Klicken Sie auf Open (Öffnen).
  8. Wählen Sie den Ordner (die Kategorie) aus, in dem das Protokoll auf dem Gerät gespeichert werden soll. Ihr Protokoll befindet sich jetzt im Gerätespeicher.
  9. Trennen Sie das Gerät von der BindIt Software und überprüfen Sie mithilfe der Tastatur, ob sich das Protokoll im gewünschten Ordner befindet.

SARS-CoV-2

KingFisher Systeme stehen an vorderster Front und helfen Laboren dabei, den Durchsatz bei der RNA-Extraktion zu erhöhen, um die enorme Nachfrage nach schnellen und genauen SARS-CoV-2-Testergebnissen zu bewältigen. MagMAX Viral/Pathogen Kits auf KingFisher Geräten bieten eine empfindliche und einfache Methode für die Nukleinsäureextraktion für SARS-CoV-2-Tests. Darüber hinaus wurden auch die Protokolle kürzlich gestrafft, um den Durchsatz zu erhöhen. 

Beispielhafter Arbeitsablauf für die Untersuchung von Proben auf Viren und Pathogene

Empfohlene SARS-CoV-2-Testkits

Anwendungsbereich von MagMAX SARS-CoV-2 Viral/Pathogen Kits

MagMAX Viral/Pathogen Kits sind für eine hohe Nukleinsäureausbeute konzipiert und eignen sich für Proben mit niedrigem Titer. Es gibt nur zwei Protokolle für den niedrigen bis hohen Eingangsvolumenbereich. Es ist kein Träger erforderlich, was eine geringere Beeinträchtigung nachgeschalteter NGS und weniger Arbeitsschritte bedeutet.

 

Die MagMAX Viral/Pathogen Nucleic Acid Isolation Kits I und II (MVP I und II) werden für die Verwendung in Forschungslaboren empfohlen. Beide Kits wurden mit neu entwickelten, optimierten Protokollen validiert, die die Verarbeitung von 200 µl Probeneingangsvolumen (im Vergleich zu standardmäßigen 400 µl Volumen) mit der Hälfte der Extraktionsreagenzien ermöglichen.

 

Die beiden MagMAX Kits sind funktional identisch, ebenso wie die Chemie, die die Annäherung von RNA und Beads sowie den gesamten Arbeitsablauf antreibt. Jedoch bestehen die folgenden zwei Unterschiede: (a) Zur Herstellung der Bead-Komponente wird aufgrund des beispiellosen Bedarfs an SARS-CoV-2-Testungen ein anderer Rohstoff verwendet und (b) das MVP II Kit ist als Großpackung erhältlich.

Weitere Informationen zur SARS-CoV-2-Testung

Anwendungshinweise und unterstützende Materialien zur Verwendung von KingFisher Geräten und MagMAX oder Dynabeads Kits für Tests und Isolierungen zu SARS-CoV-2 finden Sie unter Ressourcen.

 

Für Leistungsdaten, Anwendungshinweise und detaillierte Protokollinformationen zu diesen Kits folgen Sie bitte dem obigen Link Erfahren Sie mehr oder über die Katalognummer dem Link zu einem der Kits.

 

Um ein Video zum Arbeitsablauf mit den MagMAX Viral/Pathogen Nucleic Acid Isolation Kits auf KingFisher Geräten anzuzeigen, folgen Sie bitte oben über die Katalognummer dem Link zu einem der Kits.

 

Informationen zu Kunststoffzubehör und Plattenkonfigurationsprodukten für KingFisher Geräte finden Sie unter Zubehör.


Forschung zu genomischer DNA

Die Isolierung genomischer DNA (gDNA) aus verschiedenen Probentypen erforderte in der Vergangenheit mehrere Aufreinigungskits. Mit dem MagMAX DNA Multi-Sample Ultra 2.0 Kit oder den KingFisher Flex Ready DNA Ultra 2.0 Prefilled Plates und KingFisher Geräten können Sie gDNA aus 50 µl bis 2 ml Probe aus Vollblut, Speichel, Buffy-Coat, Wangenabstrichen oder anderen biologischen Probenmaterialien isolieren. Die damit aufgereinigte gDNA ist ideal für viele nachfolgende molekularbiologische Anwendungen wie qPCR, NGS und Microarray-Analyse.

 

Eine leicht zugängliche, nicht invasive und zuverlässige Quelle für gDNA, die für die nachfolgende genetische Analyse geeignet ist, ist Speichel. Das MagMAX gDNA Saliva Kit, das für ein führendes Genomik-Unternehmen zur Verwendung mit KingFisher Geräten entwickelt wurde, ist speziell für die gDNA-Isolierung aus Speichel optimiert.

Beispielhafter Arbeitsablauf für gDNA

Beispielhafter Arbeitsablauf für gDNA aus Speichel

Empfohlene gDNA-Kits

Anwendungsbereich von MagMAX gDNA-Kits

Verwenden Sie das MagMAX DNA Multi-Sample Ultra 2.0 Kit, um hochaufgereinigte gDNA sowohl aus kleinen als auch großen Probeneingangsvolumen zu gewinnen. Das Kit erzielt maximale Ausbeuten durch die Behandlung der Proben mit Proteinase K (PK) und P-Enhancer, gefolgt von einer Behandlung mit der innovativen Lyse-/Bindungslösung für die gleichzeitige Lyse von Zellen, Denaturierung von Proteinen und Anlagerung von gDNA an die hochgradig bindenden magnetischen Beads. Entwickelt für größtmögliche Flexibilität kann mit dem Kit für einen reibungslosen Prozess auf Schritte zur Normalisierung von Proben- und Puffervolumen verzichtet werden. So können Sie beispielsweise Proben mit Volumen von 50 µl und 400 µl gleichzeitig auf derselben Platte bearbeiten.

 

Die Reagenzien für das MagMAX DNA Multi-Sample Ultra 2.0 Kit sind auch in Großpackungen erhältlich, sodass Sie 2.000 Proben mit einem Volumen von 50 bis 200 µl oder 1.000 Proben mit einem Volumen von 200 bis 400 µl verarbeiten können.

 

Die KingFisher Ready DNA Ultra 2.0 Prefilled Plates enthalten dieselben Reagenzien und liefern dieselben hochwertigen Ergebnisse wie das MagMAX DNA Multi-Sample Ultra 2.0 Kit; die Platten sind aber bereits vorgefüllt. Dadurch entfällt das erforderliche Pipettieren von Lyse- und Waschlösungen bzw. der magnetischen Beads. Das Protokoll ist einfach: Ziehen Sie lediglich die Folie ab, geben Sie die Probe und die Lösungen mit Enhancer bzw. Proteinase K hinzu und legen Sie die Platte in das Gerät ein.

Verwenden Sie das MagMAX gDNA Saliva Kit mit KingFisher Geräten, um hochaufgereinigte gDNA aus Speichelproben zu gewinnen. Mit dem Kit werden Proben mit einer innovativen Lyse-/Bindungslösung zur gleichzeitigen Lyse von Zellen, Denaturierung von Proteinen und Anlagerung von gDNA an die hochgradig bindenden magnetischen Beads behandelt. Entwickelt für größtmögliche Flexibilität kann mit dem Kit für einen reibungslosen Prozess auf Schritte zur Normalisierung von Proben- und Puffervolumen verzichtet werden. So können Sie beispielsweise Proben mit Volumen von 50 µl und 400 µl gleichzeitig auf derselben Platte bearbeiten. Der Arbeitsablauf ist kompatibel mit Lösungen für die Speichelentnahme wie Oragene® von Genotek, GeneFiX™ von IsoHelix und SalivaGard® von Biomatrica.

Weitere Informationen zu MagMAX gDNA Kits

Für Leistungsdaten und Protokollinformationen zu diesen MagMAX Kits folgen Sie bitte dem obigen Link Erfahren Sie mehr zum entsprechenden Kit.

 

Informationen zu Kunststoffzubehör und Plattenkonfigurationsprodukten für KingFisher Geräte finden Sie unter Zubehör.

 


Zellfreie DNA und RNA

Die „Liquid Biopsy“ oder Flüssigbiopsie von zellfreier DNA (cfDNA) oder zellfreier Gesamtnukleinsäuren (cfTNA) aus Plasma, Serum oder Urin stellt einen nicht invasiven Ansatz zum Nachweis und Monitoring von Zielsequenzen im Zusammenhang mit Erkrankungen wie Krebs dar. Die MagMAX Kits für zellfreie Nukleinsäuren zur Verwendung auf KingFisher Geräten sind ideal für die Forschung zur Liquid Biopsy. Sie sind speziell für die Anreicherung von zellfreier DNA (cfDNA) und zellfreier Gesamtnukleinsäuren (cfTNA) optimiert, und nicht für die genomische DNA (gDNA), was eine erhöhte Ausbeute und geringere Startvolumen bedeutet. 

 

Beispielhafter Arbeitsablauf für cfDNA oder cfTNA in der Liquid Biopsy

Empfohlene cfDNA- und cfTNA-Kits

Anwendungsbereich von MagMAX cfDNA- und cfTNA-Kits

Für die Liquid Biopsy wird meist zellfreie DNA (cfDNA) verwendet, die aus normalen und aus Krebszellen stammt. Die ausschließlich vom Tumor stammende DNA im Blutstrom wird in der Regel als zirkulierende Tumor-DNA (ctDNA) bezeichnet. Sie liefert Informationen über einen Tumor, die sonst nur schwer zugänglich wären. In diesen Kits kommen magnetische Beads und eine optimierte Chemie für eine noch effizientere Nukleinsäureisolierung zusammen, sodass insbesondere die fragmentierte cfDNA, und nicht die größeren DNA-Moleküle, gewonnen wird. Dieser Aspekt der Anreicherung für den cfDNA-Anteil der Gesamtnukleinsäuren stellt sicher, dass die kürzere ctDNA konzentriert und für die nachfolgende Analyse mittels qPCR, digitaler PCR (dPCR) oder Next-Generation-Sequenzierung (NGS) bereit ist.

 

Während die Bedeutung der cfDNA immer mehr Anerkennung findet, ist dennoch davon auszugehen, dass sie nur die halbe Geschichte erzählt. Die cfRNA-Sequenzen fungieren in der Form von microRNAs und Genfusionen als kritische Biomarker. Die Aufnahme von cfRNA mit cfDNA in das Total Nucleic Acid Kit bietet Forschern die Möglichkeit, ihre Studien zu erweitern und die medizinische Forschung voranzubringen.

 

Verwenden Sie das MagMAX Cell-Free DNA Isolation Kit mit KingFisher Geräten, Oncomine Assays und anderen nachgeschalteten Anwendungen, um den Arbeitsablauf bei der Liquid Biopsy von der Extraktion und Aufreinigung bis hin zur Analyse zu optimieren.

 

Verwenden Sie das MagMAX Cell-Free Total Nucleic Acid Isolation Kit, um Ihren Liquid-Biopsy-Arbeitsablauf zu erweitern und sowohl zellfreie DNA als auch zellfreie RNA (cfRNA) aus derselben Probe zu gewinnen.

Weitere Informationen zu MagMAX cfDNA und cfTNA Kits

Für Leistungsdaten, Anwendungshinweise und detaillierte Protokollinformationen zu den MagMAX Kits folgen Sie bitte dem obigen Link Erfahren Sie mehr zum entsprechenden Kit.

 

Um ein Video zum Arbeitsablauf mit dem MagMAX Cell-Free DNA Isolation Kit auf KingFisher Geräten anzuzeigen, folgen Sie bitte oben über die Katalognummer dem Link zum Kit.

 

Informationen zu Kunststoffzubehör und Plattenkonfigurationsprodukten für KingFisher Geräte finden Sie unter Zubehör.


DNA und RNA aus FFPE-Proben

Bei Proben aus der klinischen Forschung zu Krebs handelt es sich in der Regel um FFPE-Proben (Formalin-fixiert und in Paraffin eingebettet), wie sie für die histopathologische Analyse und Gewebearchivierung verwendet werden. Diese Methode konserviert das Gewebe und ermöglicht eine langfristige Lagerung. Aber die umfangreiche chemische Quervernetzung der Nukleinsäuren kann eine nachfolgende Verarbeitung für Anwendungen wie die Next-Generation-Sequenzierung (NGS) erschweren.

 

Mit dem MagMAX FFPE DNA/RNA Ultra Kit und KingFisher Geräten können Sie nacheinander DNA, RNA, microRNA oder sowohl DNA als auch RNA aus FFPE- bzw. fixierten Proben isolieren. Die extrahierte genomische DNA (gDNA) ist von hoher Qualität und die Ausbeuten sind vergleichbar mit denen von frischgefrorenem Blut. Das Kit eignet sich hervorragend für die Verwendung mit Ion Torrent™ Oncomine™ Assays sowie PCR und NGS, selbst wenn das FFPE-Gewebe älter als 25 Jahre ist.

Beispielhafter Arbeitsablauf für die FFPE-Isolierung

Empfohlene Kits für DNA und RNA aus FFPE-Proben

Anwendungsbereich

Verwenden Sie das MagMAX FFPE DNA/RNA Ultra Kit für die schnelle und zuverlässige Nukleinsäureisolierung aus FFPE-Proben. Sie können sogar DNA und RNA nacheinander in einem einzigen Arbeitsablauf aus derselben Probe extrahieren und so mehr Daten aus Ihren wertvollen Proben gewinnen. Sie können beispielsweise wichtige Biomarker untersuchen, wie z. B. Hotspot-Mutationen, CNVs, Genfusionen und Indels.

 

Das Kit wurde für mehrere Arten von Forschungsproben validiert, darunter Biopsien von soliden Tumoren, Stanzbiopsien und Feinnadelaspirationen. Es ist zudem kompatibel mit CitriSolv™ Entparaffinierungsmittel, das eine weniger toxische Alternative zur Entparaffinierung mit Xylol darstellt und auch ohne Abzug verwendet werden kann.

 

Um den Entparaffinierungsprozess zu beschleunigen, koppeln Sie das FFPE DNA/RNA Ultra Kit mit dem Applied Biosystems™ AutoLys™ System. Dieses besteht aus vorbehandelten Röhrchen und einem Gestellsystem zur Verringerung der Pipettierschritte; AutoLys Röhrchen und Zubehör machen gefährliche Chemikalien überflüssig und minimieren den Verlust von Gewebeproben.

Weitere Informationen

Für Leistungsdaten, Anwendungshinweise und detaillierte Protokollinformationen zu diesem MagMAX Kit folgen Sie bitte dem obigen Link Erfahren Sie mehr.

 

Informationen zu Kunststoffzubehör und Plattenkonfigurationsprodukten für KingFisher Geräte finden Sie unter Zubehör.


Gesamt-RNA und miRNA

Die Isolierung verschiedener RNA-Typen aus verschiedenen Probentypen für Genexpressionsstudien erforderte in der Vergangenheit mehrere Aufreinigungskits. Das MagMAX mirVana Total RNA Isolation Kit ist auf die Extraktion von Gesamt-RNA, einschließlich kleiner RNAs und microRNAs (miRNAs), aus den meisten biologischen Proben, wie Plasma/Serum, Vollblut, solidem Gewebe, kultivierten Zellen, Urin usw., optimiert. Die Extraktion ist phenolfrei und nicht organisch.

Beispielhafter Arbeitsablauf für Gesamt-RNA oder miRNA

Empfohlenes Gesamt-RNA-Isolierungskit

Anwendungsbereich des MagMAX mirVana Total RNA Isolation Kits

Verwenden Sie das MagMAX mirVana Total RNA Isolation Kit für die Isolierung (mit niedrigem oder hohem Durchsatz) der tatsächlichen Gesamt-RNA, was den gesamten Bereich der in Zellen vorhandenen RNA-Typen abdeckt, von kleinen RNAs wie microRNAs (miRNAs) bis hin zu nicht codierender RNA, Messenger-RNA (mRNA) und ribosomaler RNA. Mit dem Kit wird hochkonzentrierte RNA in nur 20 µl Nuklease-freiem Wasser eluiert, und die enthaltenen Reagenzien stabilisieren und konservieren die RNA über einen längeren Zeitraum.

 

Die extrahierte RNA eignet sich für eine Reihe von nachgeschalteten Genexpressionsanwendungen wie miRNA-Seq und qRT-PCR. Arbeitsabläufe wurden für das TaqMan™ Advanced miRNA cDNA Synthesis Kit und andere TaqMan Advanced miRNA Assays validiert.

Weitere Informationen zum MagMAX mirVana Total RNA Isolation Kit

Für Leistungsdaten zu diesem MagMAX Kit folgen Sie bitte dem obigen Link Erfahren Sie mehr.

 

Für Protokollinformationen und Anwendungshinweise zu diesem MagMAX Kit oder um ein Video zum Arbeitsablauf mit diesem Kit anzuzeigen (nur manuelle Isolierung), folgen Sie bitte oben über die Katalognummer dem Link zu diesem Kit.

 

Informationen zu Kunststoffzubehör und Plattenkonfigurationsprodukten für KingFisher Geräte finden Sie unter Zubehör.


mRNA

Forschung auf dem Gebiet der Transkriptomik arbeitet mit Messenger-RNA (mRNA), die aus einer Vielzahl von Proben gewonnen werden kann. Die Dynabeads Beads für die mRNA-Isolierung erfassen mRNA-Moleküle aus einer Vielzahl von unbehandelten Proben, und zwar unter Zuhilfenahme der Basenpaarung zwischen den Poly(A)-Schwänzen am 3'-Ende der meisten mRNAs und den Oligo(dT)25-Resten, die kovalent an die Oberfläche der Dynabeads gekoppelt sind. Die automatisierten Protokolle auf KingFisher Geräten benötigen nur 15 Minuten und die isolierte mRNA eignet sich für alle nachfolgenden Anwendungen.

Beispielhafter Arbeitsablauf für die Untersuchung von Proben auf Viren und Pathogene

Empfohlene Kits für die mRNA-Forschung

Anwendungsbereich von Dynabeads mRNA Purification Kits

Das Dynabeads mRNA Purification Kit nutzt als Ausgangsmaterial Gesamt-RNA und ist eine gute Wahl, wenn Sie bereits Gesamt-RNA isoliert haben, z. B. mit dem MagMAX mirVana Total RNA Isolation Kit.

 

Allerdings handelt es sich nur bei 1 bis 5 % des Gesamt-RNA-Gehalts von Zellen tatsächlich um mRNA. Wenn Sie nur das mRNA-Transkriptom benötigen, müssen Sie nicht die Gesamt-RNA isolieren. Dynabeads mRNA DIRECT™ Kits und Verfahren zur Aufreinigung zielen nur auf die mRNA-Moleküle ab und ziehen diese bei einer Vielzahl von unbehandelten Proben direkt aus der Lösung. Ribosomale RNA, DNA, Proteine und kleine RNA-Moleküle (z. B. Transfer-RNA, microRNA und kleine nukleoläre RNA) binden nicht an die Beads und werden verworfen.

Mit allen drei Kits können Sie komplementäre DNA (cDNA) direkt auf den Beads synthetisieren, um eine wiederverwendbare cDNA-Festphasenbibliothek zu erstellen oder sogar eine qRT-PCR direkt an der Bead-gebundenen cDNA durchführen, wobei eine empfindliche quantitative Analyse des gesamten Transkriptoms bis auf Ebene einer einzelnen isolierten Zelle möglich ist. Verwenden Sie das Dynabeads mRNA Purification Kit, um mRNA zu isolieren, wenn Sie die Gesamt-RNA bereits aufgereinigt haben.

 

Verwenden Sie das Dynabeads mRNA DIRECT Purification Kit, um mRNA direkt aus dem unbehandelten Lysat nahezu aller biologischen Proben von Wirbeltieren, Wirbellosen, Pflanzen, Pilzen oder Bakterien zu isolieren. Das empfindliche Verfahren ermöglicht die cDNA-Synthese und die cDNA-Bibliothekserstellung aus Eingangsproben von nur einer Zelle.

 

Das Dynabeads mRNA DIRECT Micro Purification Kit eignet sich für dieselben Anwendungen wie das mRNA DIRECT Purification Kit, ist jedoch für Mikroproben von 10.000 Zellen bzw. 5 mg Gewebe oder weniger optimiert.

Weitere Informationen zu Dynabeads Kits

Für Protokolle zu diesen Dynabeads Kits folgen Sie bitte oben über die Katalognummer dem Link zum entsprechenden Kit.

 

Informationen zu Kunststoffzubehör und Plattenkonfigurationsprodukten für KingFisher Geräte finden Sie unter Zubehör.


DNA und RNA von Viren/Pathogenen

Der Nachweis von Viren in menschlichen Körperflüssigkeiten ist für die Erforschung und das Management von Infektionskrankheiten von entscheidender Bedeutung. Die Prüfung der Viruslast dient zur Beurteilung der Wirksamkeit einer antiviralen Therapie sowie zur Überwachung des Krankheitsverlaufs und zur frühzeitigen Aufdeckung einer Infektion. MagMAX Viral/Pathogen Kits auf KingFisher Geräten bieten eine empfindliche und einfache Methode für die Nukleinsäureextraktion aus Proben, die Viren oder andere Krankheitserreger (Pathogene) enthalten.

 

Hinweis: Spezifische Informationen zur Verwendung von MagMAX Viral/Pathogen Kits für SARS-CoV-2-Tests finden Sie vorstehend unter SARS-CoV-2 Tests.

Beispielhafter Arbeitsablauf für die Untersuchung von Proben auf Viren und Pathogene

Empfohlene Testkits für Viren/Pathogene

Anwendungsbereich von MagMAX Viral/Pathogen Kits

MagMAX Viral/Pathogen Kits sind für eine hohe Nukleinsäureausbeute konzipiert und eignen sich für Proben mit niedrigem Titer. Es gibt nur zwei Protokolle für den niedrigen bis hohen Eingangsvolumenbereich. Es ist kein Träger erforderlich, was eine geringere Beeinträchtigung nachgeschalteter NGS und weniger Arbeitsschritte bedeutet.

 

Die MagMAX Viral/Pathogen Nucleic Acid Isolation Kits bieten eine empfindliche und einfache Methode für die RNA- und DNA-Extraktion aus Proben, die Viren und gramnegative Bakterien enthalten. Dies wurde durch den erfolgreichen Nachweis einer Eingabe von lediglich 50 Kopien in verschiedenen Probentypen demonstriert.

 

Das MagMAX Viral/Pathogen Ultra Nucleic Acid Isolation Kit (A42356) enthält dieselben Reagenzien wie die standardmäßigen Viral/Pathogen Nucleic Acid Isolation Kits. Darüber hinaus umfasst eine zusätzliche Enzymmischung, die zur Lyse und Gewinnung von Nukleinsäuren aus schwierigen Krankheitserregern wie grampositiven Bakterien, Hefen und Pilzen benötigt wird. Es kann für die breitangelegte Detektion und Identifizierung unbekannter Pathogene verwendet werden, einschließlich schwer nachweisbarer Mikrobiota der Atemwege. Da die zusätzlichen Enzyme nicht für die Isolierung von Virus-RNA benötigt werden, wird dieses Kit nicht für SARS-CoV-2-Tests empfohlen.

 

Hinweis: Wenn Sie SARS-CoV-2-RNA isolieren müssen, bestellen Sie das MagMAX Viral/Pathogen II (MVP II) Nucleic Acid Isolation Kit (Katalognummer A48383R), nicht das MagMAX Viral/Pathogen Ultra Nucleic Acid Isolation Kit (Katalognummer A42356). Die Ultra-Version enthält eine zusätzliche Enzymmischung für die Lyse grampositiver Bakterien und Pilze, die für die RNA-Isolierung von SARS-CoV-2 nicht benötigt wird.

Weitere Informationen zu MagMAX Viral/Pathogen Kits

Für Leistungsdaten, Anwendungshinweise und detaillierte Protokollinformationen zu diesen MagMAX Kits folgen Sie bitte dem obigen Link Erfahren Sie mehr oder über die Katalognummer dem Link zu einem der Kits.

 

Um ein Video zum Arbeitsablauf mit den MagMAX Viral/Pathogen Nucleic Acid Isolation Kits auf KingFisher Geräten anzuzeigen, folgen Sie bitte oben über die Katalognummer dem Link zum jeweiligen Kit.

 

Informationen zu Kunststoffzubehör und Plattenkonfigurationsprodukten für KingFisher Geräte finden Sie unter Zubehör.


Mikrobiomforschung mit DNA und RNA

Das menschliche Mikrobiom hat sich als ein Schlüsselfaktor bei der Diagnose und Behandlung von Krankheiten herauskristallisiert, aber die Identifizierung und Quantifizierung der Mikroben, aus denen es besteht, stellen eine große Herausforderung dar. Obwohl die im Rahmen der Metagenomik eingesetzte Sequenzierungstechnologie ein umfassendes Profil aller Gene in einer Umweltprobe liefern kann, erfordert sie eine geeignete Probe mit reiner, hochqualitativer DNA und RNA. Das MagMAX Microbiome Ultra Nucleic Acid Isolation Kit und KingFisher Geräte können diese Probe mit einem effizienten, automatisierten Arbeitsablauf liefern.

Beispielhafter Arbeitsablauf für Proben in der Mikrobiomforschung

Empfohlenes Kit zur Mikrobiomforschung

Anwendungsbereich des MagMAX Microbiome Ultra Kit

Das menschliche Mikrobiom ist komplex und facettenreich, und jedes Körperhabitat beherbergt verschiedene dominante Signaturtaxa. Der Darm enthält den Großteil der mit dem menschlichen Körper assoziierten Mikrobiota und enthält eines der am gründlichsten untersuchten Ökosysteme des Körpers. Für diese Analysen werden häufig Stuhlproben verwendet, da sie einfach zu beschaffen sind und eine große Menge an Biomasse enthalten. Körperflüssigkeiten wie Speichel und Urin sind weniger gut untersucht, aber auch sie enthalten eine jeweils ganz eigene Bakteriengemeinschaft.

 

Verwenden Sie das MagMAX Microbiom Ultra Nucleic Acid Isolation Kit, um die Gesamtnukleinsäuren aus Stuhl, Urin, Speichel und anderen Proben zu isolieren. Es kann hochreine, qualitativ hochwertige, inhibitorfreie DNA und RNA mit hoher Ausbeute extrahieren, die sich ideal für die Metagenomikforschung und andere nachfolgende Anwendungen eignen. Der enzymbasierte Verdau ermöglicht die Gewinnung von Nukleinsäuren von einer Vielzahl von Mikroorganismen ohne zusätzliche Verarbeitungsschritte.

 

Das Kit kann sowohl virale als auch bakterielle Nukleinsäuren isolieren und wurde mit Fäkalproben von Säugetieren, Reptilien, Fischen und Vögeln, VTM-, Haut- und Milchproben sowie Hefe- und Bakterienkulturen getestet. Es wird für Forschungslabore empfohlen, die eigene Mikrobiomtests entwickeln und Lösungen für die Isolierung der Gesamtnukleinsäuren mit niedrigem und/oder hohem Durchsatz benötigen.

Weitere Informationen zu MagMAX Viral/Pathogen Kits

Für Leistungsdaten und Anwendungshinweise zu diesem MagMAX Kit folgen Sie bitte dem obigen Link Erfahren Sie mehr.

 

Für Protokollinformationen zu diesem MagMAX Kit folgen Sie bitte oben über die Katalognummer dem Link zum Kit.

 

Informationen zu Kunststoffzubehör und Plattenkonfigurationsprodukten für KingFisher Geräte finden Sie unter Zubehör.


Pflanzliche DNA und RNA

Die Extraktion von DNA und RNA aus Pflanzen birgt spezielle Herausforderungen im Umgang mit Kohlenhydraten, Phenolen und anderen im Pflanzengewebe reichlich vorhandenen Verbindungen. MagMAX™ Plant DNA Isolation Kit, automatisiert mit KingFisher Geräten, kann Nukleinsäuren aus einer Vielzahl von Pflanzenarten und verschiedenen Typen pflanzlichen Gewebes isolieren.

Beispielhafter Arbeitsablauf für Pflanzen-DNA

Beispielhafter Arbeitsablauf für Pflanzen-RNA

Empfohlene Kits für die Extraktion pflanzlicher DNA und RNA

Anwendungsbereich von MagMAX Plant DNA Kits oder Plant RNA Kits

Pflanzliche Zellwände lassen sich zum Teil schwer aufschließen, und Lysate enthalten oft eine beträchtliche Menge an Verbindungen wie Tanninen, Phenolen und komplexen Polysacchariden, die die Nukleinsäurequalität herabsetzen und nachfolgende Reaktionen beeinträchtigen können. Trotz dieser Herausforderungen können diese MagMAX Kits DNA oder RNA effektiv aus verschiedenen Pflanzenproben wie Arabidopsis thaliana, Paprikablättern, Rapsblättern, Maisblättern, Frühlingszwiebeln, Zitronenblättern, Haferblättern, Orangen, Kiefernnadeln, Spinatblättern, Tomatenblättern und Weizengrasblättern isolieren.

 

Verwenden Sie die MagMAX Plant DNA Kits und Plant RNA Kits mit KingFisher Geräten für die automatisierte Aufreinigung von DNA und RNA aus einer Vielzahl von Pflanzenarten und pflanzlichen Geweben, einschließlich Pflanzenpilzen. Die aufgereinigte DNA oder RNA ist frei von Proteinen, Nukleasen und anderen Kontaminanten, Inhibitoren bzw. Nukleinsäuren und kann für zahlreiche nachgeschaltete Anwendungen wie PCR, qPCR und NGS verwendet werden. Die Kits sind für die Isolierung von DNA und RNA aus Pflanzenproben mit einem Volumen von 10 bis 100 mg optimiert.

Weitere Informationen zu MagMAX Plant DNA Kits und Plant RNA Kits:

Für Leistungsdaten und Protokolle zu einem dieser MagMAX Kits folgen Sie bitte oben über die Katalognummer dem Link zum Kit.

 

Informationen zu Kunststoffzubehör und Plattenkonfigurationsprodukten für KingFisher Geräte finden Sie unter Zubehör.


Immunpräzipitation

Die Immunpräzipitation (IP) bzw. Co-Immunpräzipitation (Co-IP) kann für die Isolierung und Konzentration eines bestimmten Proteins oder Proteinkomplexes aus einer Probe mit Tausenden unterschiedlichen Proteinen verwendet werden. Dynabeads magnetische Beads, mit denen die Ausbeute und Reproduzierbarkeit maximiert und die unspezifischen Bindungen minimiert werden, sind zum Goldstandard für die IP auf Basis magnetischer Beads geworden. Mit den jetzt für KingFisher Geräte verfügbaren Automatisierungsprotokollen können Sie nun Proteine in nur 40 Minuten und mit minimaler manueller Bearbeitungszeit erfassen und analysieren.

Beispielhafter Arbeitsablauf für die Immunpräzipitation (IP)

Empfohlene Kits und Produkte für die Immunpräzipitation

Anwendungsbereich von Dynabeads für die Immunpräzipitation

Es gibt zwei Varianten des IP-Prozesses. Wenn Ihr Zielprotein reichlich vorhanden ist, können Sie die direkte Methode verwenden, bei der der Primärantikörper (AK) zuerst mit den Dynabeads magnetischen Beads inkubiert wird, gefolgt von einem Waschschritt, um ungebundene Antikörper zu entfernen. Die AK-gebundenen Beads werden dann für die Bindung mit der Probe inkubiert, gefolgt von einem Wasch- und einem Elutionsschritt.

 

Wenn das Zielprotein nicht in größerer Menge vorhanden ist, können Sie die indirekte Methode verwenden, bei der der Primärantikörper zuerst mit dem Zelllysat inkubiert wird, sodass sich ein Antikörper-Antigen-Komplex bildet. Der Komplex wird dann von den zugegebenen Dynabeads Beads erfasst, gefolgt von einem Wasch- und Elutionsschritt.

 

IP kann zwar manuell durchgeführt werden, die Anzahl der Waschschritte und die manuelle Bearbeitungszeit nehmen jedoch proportional zur Anzahl der Proben zu. Durch die Automatisierung des Prozesses mit KingFisher Geräten können Ungleichheiten beseitigt werden, die durch Pipettieren und andere manuelle Bearbeitungsschritte entstehen. Die automatisierten Protokolle bilden die manuellen Protokolle nach, um eine gleich hohe Zielproteinausbeute und die gleiche geringe unspezifische Bindung und hohe Reproduzierbarkeit zu erzielen. Unabhängig davon, ob Sie 10 oder 96 Proben bearbeiten möchten, dauert das IP-Protokoll weniger als 40 Minuten. Laden Sie einfach die Reagenzien auf die Platten, drücken Sie die Starttaste und bis Sie sich auf die nachfolgende Analyse vorbereitet haben, ist die IP fertiggestellt. Eine gewisse Optimierung, z. B. bei der Inkubationszeit, kann in Abhängigkeit von Ihrem Antikörper und der Häufigkeit und/oder Spezifität Ihres Zielproteins erforderlich sein.

 

Die Auswahl des passenden Kits hängt vom Zielprotein ab, das Sie isolieren müssen. Wenn Sie einen primären Antikörper gegen das Protein besitzen, empfehlen wir die Verwendung von Dynabeads Protein A oder G bzw. der zugehörigen Kits. Wenn Sie einen sekundären Antikörper haben, sollten Sie eines der Dynabeads M-280 IgG Produkte verwenden. Und wenn Sie einen biotinylierten Antikörper oder Liganden haben, verwenden Sie Dynabeads M-280 Streptavidin. 

Weitere Informationen zu Dynabeads und Immunpräzipitation

Für Leistungsdaten, Anwendungshinweise und Protokollinformationen zu einem dieser Dynabeads Produkte folgen Sie bitte oben über die Katalognummer dem Link zum Produkt.

 

Informationen zu Kunststoffzubehör und Plattenkonfigurationsprodukten für KingFisher Geräte finden Sie unter Zubehör.


Peptid-Mapping und Peptid-Quantifizierung

Peptid-Mapping ist ein grundlegender Arbeitsablauf bei der Charakterisierung biotherapeutischer Proteine und unerlässlich für die Aufklärung der primären Aminosäurestruktur von Proteinen. Um eine Peptid-Karte (Peptide Map) zu erzeugen, muss das therapeutische Protein zunächst über eine chemische oder enzymatische Reaktion in seine konstituierenden Peptide verdaut werden. Die derzeit für den Verdau und das Mapping verwendeten Methoden erfordern jedoch langwierige, mehrstufige, manuelle Prozesse, die einem niedrigen Grad an Reproduzierbarkeit, Empfindlichkeit und Datenzuverlässigkeit unterliegen.

 

Die Thermo Scientific SMART Digest Magnetic Kits in Kombination mit KingFisher Geräten können einen sonst 24 Stunden dauernden Prozess auf eine Stunde oder weniger verkürzen, einen Großteil der manuellen Arbeitsschritte automatisieren und Quellen für Abweichungen und manuelle Fehler eliminieren.

Beispielhafter Arbeitsablauf für das Peptid-Mapping

Beispielhafter Arbeitsablauf für die Quantifizierung von Peptiden

Empfohlene Kits zum Peptid-Mapping und zur Peptidquantifizierung

Anwendungsbereich von SMART Digest Kits

Thermo Scientific SMART Digest Kits in Kombination mit KingFisher Geräten stellen den neuesten Fortschritt beim automatisierten Proteinverdau für Anwendungen zum Peptid-Mapping und zur Peptidquantifizierung dar. Die Kits ermöglichen einen schnellen, einfachen, reproduzierbaren und leicht zu automatisierenden Proteinverdau.

 

Die Kits zum Proteinverdau verwenden optimierte wärmebeständige Enzyme auf magnetischen Beads, wodurch die Möglichkeit posttranslationaler Modifikationen minimiert wird. Durch die Automatisierung des Prozesses wird die manuelle Handhabung minimiert, das optimale Timing von Reaktionen gewährleistet und die Exposition gegenüber hohen Temperaturen reduziert, was die Reproduzierbarkeit der Ergebnisse verbessert.[1]

 

Bei Immunaffinitätskits (IA-Kits) wird der enzymatische Verdau mit einer über die IA vermittelten Anlagerung an einem einzelnen Bead kombiniert, was für eine hohe Empfindlichkeit sorgt. Diese Innovation ermöglicht ein hohes Vertrauen in Ihre Ergebnisse aus der Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC) und der Flüssigchromatographie/Massenspektrometrie (LC-MS). SMART Digest Kits bieten vor allem Vorteile für Anwendungen zur Charakterisierung bzw. Quantifizierung in den Bereichen Biopharma und Biomarker.

 

Für Peptid-Mapping-Anwendungen können Sie zwischen einem Verdau mit optimiertem hitzestabilem Trypsin, Chymotrypsin oder Proteinase K für eine sequenzspezifische Aufspaltung Ihres Proteins wählen. Das auf magnetischen Beads befindliche Enzym wird bei erhöhten Temperaturen für einen beschleunigten Verdau unter Bedingungen der Proteindenaturierung aktiviert.

  • Trypsin spaltet am C-Terminus von Lysin- und Arginin-Aminosäureresten.
  • Chymotrypsin spaltet die Peptidbindungen, die durch aromatische Reste wie Tyrosin, Phenylalanin und Tryptophan gebildet werden.
  • Proteinase K spaltet die Peptidbindung neben der Carboxygruppe aliphatischer und aromatischer Aminosäuren mit blockierten Alpha-Aminogruppen.

 

Für Peptidquantifizierungsanwendungen wird mit den SMART Digest IA-Kits ein Trypsin-Verdau mit Immunaffinitätserfassung in einem einzigen Well durchgeführt. Die Immunaffinitätskomponente (Streptavidin, Protein A oder Protein G) wird normalerweise verwendet, um die Empfindlichkeit zu erhöhen, indem Sie Ihre in geringen Mengen vorliegenden Proteine aus den komplexen biologischen Matrices aufreinigen.

  1. Farrell A, Bones J, Cook K, Patel S, Schwahn A, Bardsley J. High-precision, automated peptide mapping of proteins. Thermo Fisher Scientific Anwendungshinweis 21682. Volltext

Weitere Informationen zu SMART Digest Produkten

Für Leistungsdaten und Anwendungshinweise zu einem dieser SMART Digest Produkte folgen Sie bitte oben über die Katalognummer dem Link zum Produkt.

 

Informationen zu Kunststoffzubehör und Plattenkonfigurationsprodukten für KingFisher Geräte finden Sie unter Zubehör.


Zellen und Exosomen

Oberhalb der molekularen Ebene von Nukleinsäuren und Proteinen können Dynabeads Reagenzien mit magnetischen Beads mit KingFisher Geräten für die automatisierte Isolierung von Zellen und Exosomen verwendet werden. So können beispielsweise T-Zellen isoliert, aktiviert und expandiert werden, indem Dynabeads Reagenzien für nachgeschaltete Anwendungen zur Zytotoxizität oder Geneditierung verwendet werden. Exosomen und zirkulierende Tumorzellen (CTCs) können isoliert und für Flüssigbiopsien (Liquid Biopsy) analysiert werden. Die Verwendung von Dynabeads Reagenzien trägt zu einer hohen Ausbeute reiner, lebensfähiger und funktionaler Zellen, deren ursprüngliche Eigenschaften erhalten geblieben sind, bei. Die Automatisierung mithilfe der KingFisher Systeme reduziert den manuellen Arbeitsaufwand und verbessert die Reproduzierbarkeit.

Empfohlene Kits für die Zell- und Exosomforschung

Anwendungsbereich von Dynabeads zur Zell- und Exosomisolierung

Es gibt drei Varianten des Zellisolationsprozesses. Bei der positiven Zellisolierung binden Dynabeads Reagenzien die Zielzellen und die Bead/Zell-Komplexe werden an die KingFisher Magnetspitzen gezogen. Nach dem Verwerfen des Überstands bleiben nur die reinen Zielzellen zurück.

 

Bei der negativen Zellisolierung werden Dynabeads Untouched™ Kits verwendet, um unerwünschte Zellen zu entfernen, wobei unversehrte Zielzellen frei von Beads in der Probe verbleiben. Zum Beispiel enthält das Dynabeads Untouched Human T Cells Kit eine Antikörpermischung zur Entfernung von B-Zellen, natürlichen Killerzellen (NK), Monozyten, Thrombozyten, dendritischen Zellen, Granulozyten und Erythrozyten, wobei alle T-Zellen – und nur T-Zellen – zur weiteren Verwendung zurückbleiben. Andere Dynabeads Untouched Kits können alle Typen bis auf die CD4- oder CD8-T-Zell-Subtypen entfernen.

 

Wenn Sie an mehreren Zelltypen interessiert sind, können Sie zellspezifische Dynabeads Reagenzien für die Depletion verwenden, um alle unerwünschten Zelltypen mit einer Effizienz von > 99 % aus einer heterogenen Probe zu entfernen. Im abgereicherten Überstand verbleiben dann nur die interessierten Zellen.

Dynabeads T-Zell-Aktivierungsprodukte imitieren die In-vivo-Interaktion von T-Zellen mit APCs, indem die beiden APC-Aktivierungssignalgeber (CD3 und CD28) mit magnetischen Beads konjugiert werden.

Auf die Isolierung von T-Zellen und Subtypen folgt oft die Aktivierung und Expansion. Die Dynabeads CD3/CD28-Technologie imitiert die In-vivo-Aktivierung der T-Zellen über die antigenpräsentierenden Zellen (APCs) und ermöglicht eine schonende und effiziente physiologische Aktivierung und Expansion von sowohl Maus- als und menschlichen T-Zellen.

 

Verwenden Sie Total Exosome Isolation Reagents, um den Gesamtbestand der Exosomen aus der Zellkultur zu isolieren und anzureichern. Anschließend können Sie diese mit Dynabeads CD9-, CD63-, CD81- oder EpCam-spezifischen Reagenzien nach bestimmten Subpopulationen aufreinigen. Oder kombinieren Sie das Dynabeads Streptavidin-Reagenz mit einem biotinylierten Antikörper Ihrer Wahl, um jede beliebige Population auf der Grundlage eines Oberflächenantigens aufzureinigen.

 

Die nachfolgende Anwendung bestimmt die Anzahl der magnetischen Beads, die für die Erfassung der Exosomen verwendet werden sollen. Halten Sie die Anzahl der Beads für den Fall der Durchflusszytometrie niedrig, um eine hohe Dichte an Exosomen pro Bead zu gewährleisten und ein starkes Signal zu erhalten. Für das Western Blotting sollten Sie eine große Anzahl von Beads verwenden, um die Gesamtoberfläche zu maximieren und ein starkes Signal zu erzeugen. Dadurch werden sehr wenige Exosomen im Überstand belassen. 

Weitere Informationen zu Dynabeads für die Zell- und Exosomisolierung

Für Leistungsdaten, Anwendungshinweise und Protokollinformationen zu diesen Dynabeads Produkten folgen Sie bitte dem obigen Link Erfahren Sie mehr zum betreffenden Produkt.

 

Informationen zu Kunststoffzubehör und Plattenkonfigurationsprodukten für KingFisher Geräte finden Sie unter Zubehör.